这些细胞培养好习惯和减少污染小细节，你做到了吗？

发表时间：2021-05-28

保证细胞间的环境无菌与稳定

首先保证工作环境干净整洁，细胞间每周定期进行紫外杀菌，每次30分钟。细胞间内保持稳定的温度、湿度及换气。

细胞实验中涉及的仪器，如：离心机、细胞计数仪、倒置显微镜、冰箱等尽量放到细胞间使用，这样可以保证和环境一起杀菌，保证仪器干净整洁，不做其他实验使用。

将要使用的耗材提前放到细胞间内，减少无关物品进入细胞间。在实验过程中减少细胞间门的开关次数，保证环境无菌。

细胞培养前人和物的无菌准备

01准备好纯水要高压灭菌后放到生物安全柜中，用来配制药品试剂等。

02抗生素提前配好，用过滤器过滤后分装，放到-20℃冰箱中保存备用。也可以直接用带有抗生素的培养基。

03需要用的血清、胰酶要提前放到4℃冰箱中解冻。血清一般会放到-80℃保存，要逐步解冻，直接放到37℃解冻会出现絮状物会影响后期使用。

04操作前要把培养基、胰酶放到37℃细胞培养箱中复温，减少低温对细胞的刺激。

05将本次实验需要使用的物品移液器、枪头、移液管等提前放到生物安全柜中，打开紫外灯灭菌20-30分钟。

06进入细胞间前要按顺序进行自身防护，在缓冲间换好、戴好：拖鞋、帽子、口罩、白大衣、手套。拖鞋和白大衣要是细胞间专用。

细胞培养无菌操作的小细节

01在操作前，先用酒精给手套消毒；打开生物安全柜，将工作台用酒精棉球擦拭一遍，等酒精挥发后，进行细胞实验操作。

02拿入到安全柜里面的物品都要用酒精喷洒消毒。

03培养基、血清、胰酶等大包装的试剂一定要进行分装到50mL、15mL离心管中使用，避免污染。如果不小心污染也不会浪费大部分试剂。

04观察培养箱中的细胞，用显微镜观察细胞生长密度、生长状态，是否染菌。培养基的消耗情况，如出现培养基变黄表示细胞需要换液，培养基营养耗尽。

05凡是在安全柜中打开的瓶子，用完要及时盖好，避免污染。在瓶盖打开过程中，尽量不要从其上方经过，避免细菌掉入。

06做完实验收拾工作台，清理垃圾，物品归位。用酒精擦拭工作台，打开紫外灯照射20-30分钟。

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