Q1

什么是脂类？

脂类是脂肪和类脂（磷脂、糖脂、固醇脂等）的统称，它是构成人体组织的正常成分，不溶于水而易溶于酒精等脂溶剂中。脂类与蛋白质、碳水化合物是人体的三大营养素，其主要功能是储能和供能。

脂滴（Lipid Droplet）是中性脂（主要为甘油三酯和酯化胆固醇）的主要贮存场所，是脂肪细胞的主要成分。正常情况下，除脂肪细胞以外，常规细胞胞质内不见或仅能看到微量脂滴。

Q2

为什么要进行脂类染色？

1

在病理情况下，心、肝、肾等实质器官容易发生脂肪异常堆积，胞质出现脂滴或者脂滴明显增多以及形成斑块等现象。因此，通过脂类染色能将这些脂滴清晰的显现出来，为病理诊断提供图像参考。

2

研究脂肪生成过程，即干细胞分化为成熟脂肪细胞的机制，对于了解糖尿病、肥胖症、心血管疾病、肝病和癌症等疾病的发病机制和寻找潜在治疗方法至关重要。通过脂类染色可以更直观地确认脂质累积和细胞分化情况。

Q3

常用的脂类染色方法有哪些？

目前常用于脂类染色的有经典苏丹染色、油红O染色以及尼罗红荧光染色。脂类染色常规适用样本包含速冻、冰冻的动植物切片以及成脂诱导培养细胞。

经典苏丹染料包括苏丹Ⅲ、苏丹Ⅳ和苏丹黑B，是常用的经典脂质染料，可显示动物组织的脂质积累和植物组织的木栓化，也可用于掩盖组织脂褐素的自发荧光。

油红O属于新一代苏丹脂质染料，其着色较经典染色法更深，特异性也更好。在观察动脉粥样硬化斑块以及肝脏和肌肉脂质积累方面具有很好的效用。G1263型改良油红O染色试剂盒（环保型）在经典异丙醇法的基础上进行了优化更新，解决了染色液易挥发、染料易沉淀的关键难题，极大的降低了染色难度。

尼罗红能与脂类物质结合并发出荧光，在530 nm波长激发下，显示强烈桔红色荧光。染色过程中基本不含有机试剂，对微小脂滴的定位和显示效果较好。可用于组织切片和培养细胞的脂类染色，对脂滴进行原位标记，并可搭配DAPI进行形态学观察。

Q4

非常规的脂类染色方法有哪些？

1

特殊石蜡切片染色法：由于脂肪易溶于有机溶剂，所以不能直接乙醇脱水包埋制成石蜡切片进行染色。若是非要制成石蜡切片，需要将初步固定后的组织先浸泡不饱和脂肪酸置换进脂滴，然后置于重金属酸溶液中固定处理，重金属酸经不饱和脂肪酸的还原作用形成黑色的重金属——脂质复合物，不会被二甲苯、乙醇等有机溶剂所溶解，对很微小的脂肪滴都能清晰显示。之后再进行脱水、透明等程序包埋成蜡块，切片后经脱蜡、透明可直接中性树胶封片，切片能够长期保存。但整个过程所需试剂繁杂，整体操作时间较长，且重金属酸属于有毒有害物质，所以一般不建议使用本染色方法。

2

制成碳蜡切片染色法：除了经典的冰冻切片染色方法外，还可以将组织制成碳蜡切片。碳蜡切片不同于石蜡切片，在组织固定水洗后，不需使用乙醇、二甲苯脱水透明可直接浸蜡包埋，且切片方法与常规石蜡切片相同，在一定程度上可以减少脂质的流失，唯一的缺点就是碳蜡吸湿性强，需避光干燥保存。

Q5

样本如何固定以及染色后如何封片？

固定：样本可不固定直接切片染色，如需固定则不能使用高浓度小分子醇、酮类的固定液固定，如丙酮和甲醇、乙醇会将脂滴从切片上洗脱从而不利于脂质染色，建议使用甲醛类水性固定液，甲醛固定对组织形态保存效果更佳。

封片：对于组织切片和细胞爬片，可以使用S2150甘油明胶、抗荧光衰减封片剂等水性封片剂封片，封片后及时拍照留存；对于培养板细胞，建议染色、清洗后不要晾干，使用1×PBS或ddH₂O覆盖细胞表面，保持细胞湿润，然后在镜下观察拍照，晾干会导致镜下脂滴发黑影响观察。

Q6

如何对脂质染色结果进行分析？

细胞：细胞经染色和洗涤之后，可以使用纯的丙酮或异丙醇等脂溶性溶剂提取出脂质结合染料，然后转移至检测板中在510-520nm测定吸光度。吸光度与样品的脂质含量成正比，并可间接用于评估脂肪生成。

组织：可以使用图像分析软件，对脂滴着色面积进行识别计算，除以总面积从而获得脂滴含量。

有奖问答

脂质染色的最佳温度是多少？

A. 2-8℃

B.10-20℃

C. 30-40℃

D. 60-80℃

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