干细胞是一种未充分分化，具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定诱导条件下，可以分化为成骨细胞、成软骨细胞和成肌细胞等，还可以分化为巨噬细胞、脂肪细胞、内皮细胞和成纤维细胞等骨髓基质细胞，具有发育为骨、软骨、脂肪、肌肉、真皮及骨髓基质等中胚层组织的潜能。

简言之，干细胞体外定向诱导分化就是选择适当的诱导剂和诱导方法，通过诱导剂与细胞表面受体结合或使细胞发生轻度可逆性损伤等，使被诱导细胞按预定的细胞类型方向分化，然后将这些定向分化的细胞进行分离和培养传代，从而得到人们所需要的细胞类型。一般的，成骨分化和成脂分化是间充质干细胞MSC必要的功能性鉴定指标。成骨分化经茜素红染色法鉴定，成脂分化经油红O染色法鉴定。

Solarbio新增了成骨/成脂诱导迷你化合物Kit，每种Kit均由对应种类经典的可用于诱导的基础试剂、用于鉴定与分析的高品质染料以及相关试剂组成，具有良好的生物活性。客户也可以根据自己的实验需求删减或添加其他的化合物，也可灵活定制专属Kit，所有组分均已经过NMR、HPLC或MS检测，以确保化合物纯度和准确性。

产品说明

基本操作（仅供参考）

1. 接种骨髓间充质干细胞

取对数生长期的细胞，按照2×10⁴cells/cm²的细胞密度接种至包被后的培养器皿中，于37℃，5% CO₂培养环境下培养至相应的融合度（成骨诱导：60~70%；成脂诱导：90~100%），弃掉上清，加入成骨诱导分化培养基（含有地塞米松、维生素C、茜素红等）或成脂诱导分化培养基（含有地塞米松、胰岛素、吲哚美辛和IBMX）。

2. 细胞分化诱导

成骨诱导：每2~3天更换诱导培养基，于37℃，5%CO₂培养环境下培养，并注意观察细胞形态变化（一般约14~28天左右）。根据细胞钙盐结晶析出和钙质结节形成的情况，决定终止细胞诱导的时间，进行后续固定和染色鉴定（茜素红染色）。

成脂诱导：于37℃，5%CO₂培养环境下培养约2~3天，更换为成脂诱导分化培养基维持液（只含有胰岛素）培养1天。按照以上换液频率继续诱导（一般是3个循环，约14天左右），并注意观察细胞形态变化。根据细胞诱导形成的脂滴数量和大小，决定终止细胞诱导的时间，并进行后续固定和染色鉴定（油红O染色）。

3. 细胞固定

吸去培养基，使用适量1×PBS清洗一次，弃去后取适量4%中性甲醛溶液覆盖培养器皿底面，室温固定30~60 min，弃去固定液再使用1×PBS清洗两次。

4. 染色鉴定

加入适量的染色工作液，染色合适的时间（茜素红：3~5min；油红O：静置染色30min），吸去染液，用1×PBS清洗两次，并加入适量1×PBS避免细胞干燥。

5. 诱导评估与分析

显微镜下观察染色效果，并进行图像采集和诱导评估。诱导成功时，成骨诱导后的钙质结节会与茜素红染料结合后呈现红色或橘红色。成脂诱导后的脂滴会与油红O染料结合后呈现红色或橘红色。

对于成骨诱导还可以进行半定量分析，上述显微观察结束后，弃上清，加入氯化十六烷基吡啶溶液，室温下孵育15~60min溶解矿化结节（茜素红），然后在562 nm处检测上清的OD值。

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