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碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法) G1480
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  • 发布日期: 2019-12-30
  • 更新日期: 2020-03-05
产品详细说明
品牌: solarbio CAS编号:
产地: 北京 英文名称: Alkaline phosphatase,简称ALP或AKP
保质期: 6个月 货号: G1480
纯度: 现询客服 % 用途范围: 碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使AB-BI磷酸盐水解,释放出磷酸不萘酚,后者不偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中
规格: 4×2ml 是否进口:

自备材料:

1、载玻片、湿盒

2、普通光学显微镜

产品简介

       碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,简称 ALP 或 AKP)为一类磷酸酯酶,广泛分布于哺乳动物组

织内,其活性所需最适 pH 9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜),如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮,还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法),其原理是在 pH9.2~9.8 的碱性条件下,细胞内碱性磷酸酶可使 AB-BI 磷酸盐水解,释放出磷酸与萘酚,后者与偶联重氮盐生成有色产物,定位于细胞质中。该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色,碱性磷酸酶活性部位呈蓝色,位于胞桨,结果较金属盐沉淀法可靠。


操作步骤:

一、涂片或切片

1、 血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定),水洗。

2、 滴加配制好的 ALP 孵育液,放入湿盒中,避光孵育 15~20min,水洗。

3、 入核固红染色液或甲基绿染色液复染 3~5min。

4、 水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

二、贴壁培养细胞

1、 取6孔板或其他容器培养的细胞,弃液,PBS清洗干净。

2、 加入ALP固定液固定3min或4%多聚甲醛固定10~15min,PBS清洗。

3、 滴加配制好的 ALP 孵育液,放入湿盒中,避光孵育 15~20min,PBS 清洗。

4、 入核固红染色液或甲基绿染色液复染 3~5min。

5、 PBS 清洗、镜检。


染色结果:

ALP 活性部位 蓝色

细胞核 红色(核固红)或绿色(甲基绿)

血液、骨髓涂片结果判断:

一般以积分报告结果,根据 100 个中性粒细胞阳性颗粒进行 0-4 计分。

细胞分值 染色特点

0 无颗粒

1 稍有颗粒

2 中等程度颗粒

3 多数颗粒

4 充满颗粒


注意事项:

1. 血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜,薄厚适宜,及时固定,否则会影响酶的活性。

2. 培养细胞染色操作过程中,清洗、染色等步骤都应轻微,以免损伤或丢失细胞。

3. ALP 孵育液易失效或降低阳性强度,即配即用,不宜久置。

4. 复染时,核固红染色液或甲基绿染色液二者取其一。

5. 每次染色时,应有阳性对照片。


相关文献:

《Hedgehog pathway inhibition causes primary follicle atresia and decreases female germline stem cell proliferation capacity or stemness》 作者:Yu Jiang, Dantian Zhu, Wenfeng Liu, Qiushi Qin, Zhi Fang and Zezheng Pan 期刊:Stem Cell Research & Therapy 影响因子:4.627 PMID:31277696



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