革兰氏染色液

  
试剂组成: 
结晶紫；碘液；95%酒精；蕃红。 
保质期1年，阴凉处保存。 
  
革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，媒染剂碘液进入菌体后与结晶紫结合，革兰氏阳性菌对碘与结晶紫摄取量多且牢固，不易被酒精脱色。革兰氏阴性菌对碘与结晶紫摄取量少，不牢固，易被酒精脱色。为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。 
  
操作步骤： 
1、标本处理： 
（1）.有菌部位的标本，如痰液、粪便、各种拭子、创面等可直接涂片。 
（2）.无菌部位的标本，如脑脊液、胸水、腹水、胆汁、尿液、关节液等，应取适量标本（高可达5-7ml）,经3000rpm 离心10min.，取沉渣涂片染色。 
2、涂片制作：菌液涂片时，用接种环沾取菌液点在载玻片上，标本可直接在玻片上涂布；菌落涂片时，先取生理盐水一滴，置玻片上，用接种针挑取菌落在盐水中涂布。制作的涂片应自然干燥，并经火焰固定，固定的温度不宜过高，以玻片背面接触手背不烫为准，否则可能使细菌形态改变。将固定后的涂片进行染色。  
3、染色方法： 
革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度，如脱色过度，则阳性菌可被误染为阴性菌；而脱色不够时，阴性菌可被误染为阳性菌。此外，菌龄也影响染色结果，如阳性菌培养时间过长，或已死亡及部分菌自行溶解了，都常呈阴性反应。 
（1）.加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。 
（2）.加上碘液后染色1分钟，水洗。 
（3）.加上95%酒精,摇动玻片,根据涂片厚度,脱色约30-60秒，水洗,吸去水分。 
（4）.加上蕃红后，染色1分钟，水洗。 
（5）.吸干或在空气中凉干后，油镜镜检。 
4．结果观察：紫色为革兰氏阳性，红色为革兰氏阴性。 

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