产地 | 中国 |
品牌 | solarbio |
货号 | P1320 |
保存条件 | 4℃ |
英文名称 | Tris-Tricine-SDS-PAGE |
保质期 | 询客服个月 |
产品名称:Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒
产品编号:P1320
说明:Tris-Tricine-SDS-PAGE凝胶制备试剂盒所提供的 APS(过硫酸铵)为固体粉末,使用前加入双蒸水溶解即配制成 10%APS 溶液(0.5g APS加5ml 双蒸水),将溶液分装后置于-20℃保存,通常半年内有效。溶液在使用中可放置4℃保存两周。
产品简介:
常规的Tris-SDS-PAGE电泳的只能分辨大分子蛋白,对于相对分子量小的,尤其是10kD以下的蛋白分辨率极低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分离分子量在1-10 kD的蛋白及多肽,成为目前电泳法变性分离多肽的主要方法。本产品包括Tricine-SDS-PAGE凝胶制备所需全套试剂,只需自备蒸馏水,即可制备高质量各种浓度的凝胶,方便、快捷,电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。
注意事项:
1、10%APS配制后分装-20度保存。APS溶液不稳定,应尽量减少室温存放时间,每次取用后立即放回冰箱,以防失效;若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换,使用-20度保存的10%APS。
2、在凝胶配制过程中,尤其是液体混匀步骤,应尽量避免气泡的产生。
3、在分离胶上层加蒸馏水时要小心操作,加水时速度不能太快。
4、丙烯酰胺具有神经毒性,操作时请穿着实验服并佩戴一次性手套。
5、本产品仅用于科研,不能用于人体实验或人体治疗。
使用说明:
I 配制分离胶
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 6%C 、凝胶缓冲液和甘油加入到离心管中混合。
2、加入10%APS和TEMED,立即涡旋混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液(1mm的mini-gel,分离胶溶液加约4ml),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3cm的水层,使凝胶表面保持平整。
4、静置,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
II 配制夹层胶
去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸将残留的水尽量吸去。
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
2、加入10%过硫酸铵和TEMED,立即涡旋混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3、将适量的夹层胶溶液迅速加至分离胶的上面(对于1mm的mini-gel,夹层胶溶液加约1ml),然后在夹层胶溶液上轻轻覆盖一层水层,使凝胶表面保持平整。
4、静置,待夹层胶和水层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。
III 配制浓缩胶
去除覆盖在夹层胶上的水层,用滤纸将残留的水吸去。
1、将不同体积的双蒸水、49.5%T 3%C 和凝胶缓冲液加入到离心管中混合。
2、加入10%过硫酸铵和TEMED,立即涡旋混匀5-10秒,以使溶液充分混匀。
3、将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
4、待凝胶聚合后,小心地拔出梳子,以免破坏加样孔。
5、进行电泳操作。
IV 电泳
将电泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入阳极缓冲液(T1225),内槽加入阴极缓冲液(T1215),30V 预电泳10min,将样品(已经过 Tricine专用上样缓冲液P1325处理)加入点样孔后30V 电泳1小时,100V电泳至溴酚蓝到达胶底部后停止电泳,进行后续的考马斯亮蓝染色或电转。
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