乳酸含量（LA）测试盒

乳酸含量（LA）测试盒的测定意义：

    乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。

乳酸含量（LA）测试盒的测定原理：

    乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙酮酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原INT生成红色物质，在530nm处有特征吸收峰。

 乳酸（LA）含量检测试剂盒说明书
微量法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称：Lactic acid (LA) content detection kit
产品商标：solarbio
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC2235
规格：100T/48S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：1520
库存状态：现货
关键词:乳酸含量|乳酸含量检测|LA|LA含量|LA含量检测
产品内容：
提取液一：液体50mL×1瓶，4℃保存。
提取液二：液体8mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体6mL×1瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体34μL×1支，4℃保存。临用前按试剂二（V）：蒸馏水（V）=10μL：450μL的比例配制试剂二溶液，现用现配。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前加入4mL蒸馏水充分溶解。
试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。临用前加4mL蒸馏水充分溶解。
试剂五：粉剂×1瓶，-20℃避光保存。临用前每瓶加入3mL 蒸馏水混匀，可分装后-20℃保存，避免反复冻融。
标准品：粉剂×1支，4℃保存。临用前加入1.04mL蒸馏水配成100μmol/mL 的标准溶液。
显色液的配制：临用前根据用量按照试剂三（V）：试剂四（V）=1：1的比例充分混匀，现配现用。

产品说明：
乳酸是生物体代谢过程中重要的中间产物，与糖代谢、脂类代谢、蛋白质代谢及细胞内能量代谢密切相关，乳酸含量是评估糖元代谢的和有氧代谢的重要指标。乳酸在乳酸脱氢酶的作用下生成丙tong酸，同时使NAD+还原生成NADH和H+，H+传递给PMS生成的PMSH2还原MTT生成紫色物质，在570nm处有特征吸收峰。

自备实验用品及仪器：
天平、研钵/匀浆器、离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、恒温水浴锅、乙醇和蒸馏水。

操作步骤：
一、样本处理：
1. 组织：按照质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g，加入1mL提取液一）加入提取液一，冰浴匀浆后于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.12mL提取液二，12000g离心10min后取上清待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL提取液一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；于4℃，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.12mL提取液二，12000g离心10min后取上清待测。
3. 血清（浆）：取100μL血清（浆）加入1mL提取液一，12000g离心10min，取0.8mL上清液，再加入0.12mL提取液二，12000g离心10min后取上清待测。
二、测定操作
1、分光光度计/酶标仪预热30min，波长调至570nm，乙醇调零。
2、标准液的稀释：将100μmol/mL 的标准溶液用蒸馏水稀释为2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625、0.03125、0.015625 μmol/mL的标准溶液待测。
3、加样表：
测定管     对照管     标准管     空白管
样品（μL）          10         10         -          -
标准品（μL）         -          -         10         -
蒸馏水（μL）         -          -          -         10
试剂一（μL）        40         50         40         40
试剂二（μL）        10          -         10         10
显色液（μL）        60         60         60         60
试剂五（μL）        20         20         20         20
在EP 管中充分混匀，于37℃水浴准确反应20min，于4℃，10000rpm 离心10min，去上清，留沉淀。
乙醇（μL）         200         200        200        200
充分溶解沉淀后，于570nm 处测定吸光值，分别记为A 测定管，A 对照管，A 标准管，A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管；ΔA 标准= A 标准管-A 空白管。

三、乳酸含量的计算：
1、标准曲线的绘制
以各标准溶液浓度为x轴，以其对应的吸光值（ΔA标准）为y轴，绘制标准曲线，得到标准方程
y=kx+b，将ΔA测定带入公式中得到x（μmol/mL）。

2、乳酸含量计算
（1） 按照蛋白含量计算
LA含量（μmol/mg prot）= x×V样品÷（V样品×Cpr）= x÷Cpr。
（2）按照样本质量计算
LA含量（μmol/g 鲜重）= x×（V上清+V提取液二）÷ （W×V上清÷V提取液一）= 1.15×x÷W。
（3）按照细胞数量计算
LA含量（μmol/104 cell）= x×（V上清+V提取液二）÷ （500×V上清÷V提取液一） = 0.0023×x。
（4）按照液体体积计算
LA含量（μmol/mL）= x×（V上清+V提取液二）÷ [V液体×V上清÷（V提取液一+V液体）]= 12.65×x。

V样品：加入的样品体积，0.01mL。：
W：样本质量，g/mL；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，蛋白浓度需自行测定；
V上清：提取时上清液体积，0.8mL；
V提取液二：加入提取液二的体积，0.12mL；
V提取液一：加入的提取液一体积，1mL；
500：细胞数量，500万个；
V液体：液体样本体积，0.1mL。

注意事项：
1. 若测定吸光值超过1.2或ΔA大于0.8，请将样品体积进行适当的稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。

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