产地 | 中国 |
品牌 | solarbio |
货号 | G7210 |
用途范围 | 蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团(如琉基、碳基等)与银的结合,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把蛋白电泳带染成黑褐色 |
英文名称 | Silver Stain for Nucleic |
纯度 | 现询客服% |
规格 | 1L |
保质期 | 1年 |
是否进口 | 否 |
产品简介
1.中文名:PAGE凝胶银染试剂盒
2.英文名:Silver Stain for Nucleic
3.分 类:生化试剂
4.保存条件:RT
5.品 牌:solarbio
PAGE凝胶银染试剂盒
别名 : 蛋白快速银染试剂盒 蛋白银染
注:1L规格指可配制的硝酸银染色液的体积,实际使用次数根据PAGE胶大小不同而不同。
产品简介:
蛋白质条带的银染是基于蛋白质中各种基团(如琉基、碳基等)与银的结合,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把蛋白电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比考马斯亮蓝高,该产品整个过程操作简单,灵敏度高,能检测到10ng以下的蛋白条带。
操作步骤:
一、染色液配制
需要配制的染色液体积根据PAGE胶的大小而定,一般的mini-PAGE胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗干净后用去离子水涮洗,染色液须用去离子水配制,现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL,可以按比例改变各成分用量。
1,固定液:取40ml染色液A,10ml染色液B加去离子水至100ml,混匀;
2,敏化液: 取30ml染色液A,10ml染色液D加去离子水至100ml,混匀;
3,硝酸银染液:称取0.12g硝酸银,用50ml去离子水溶解,加入20ul溶液C混匀,加去离子至100ml现用 现配。
4,显色液: 10ml溶液E和30ul溶液C加入去离子水至100ml,混匀,现用现配。
5,终止液:取5ml染色液B加去离子水稀释至100ml,现用现配。
二、染色:
1,PAGE电泳结束后,将PAGE蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中,用固定液固定30min。
2,将PAGE胶转移至敏化液中,使染液没过PAGE胶,室温作用30min。可置于摇床上缓慢摇晃
3,弃去敏化液,用去离子水漂洗三次,每次10min。
4,将PAGE胶转移至硝酸银染液中,使染液没过PAGE胶,室温摇晃40min。
5,将PAGE胶转移至显色液中,使显色液没过PAGE胶,室温摇晃,该显色一般在10min左右,。
6,在选择合适的时间进行终止,弃去显色液,加入终止液即可。*可进行信号收集保存。
注意事项:
1. 银染主要出现在PAGE胶的表面,使用薄胶(0.5-0.75mm)可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。考染过程中的乙酸会干扰银染,因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸彻底洗净。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的,尤其是碱性蛋白染色效果差。因此,不宜用银染测定不同蛋白的比例。
4. 染色过程中,缓慢的振荡是必要的,一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致,所以全程中都应带手套操作。
6. PAGE凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS的去离子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面,可能是在几步漂洗过程中洗得不够彻底,或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
9. PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质会干扰银染。
10. 室温操作时,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。
11. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
12. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。
13. 银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。
14. 银染容器最理想的是玻璃平皿,其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。
PAGE凝胶银染试剂盒的详细描述
PAGE凝胶银染试剂盒的原理是银离子可与核酸形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把核酸电泳带染成黑褐色。它主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色。其灵敏度比EB高200倍,该产品整个过程只需要20分钟,操作简单,灵敏度高,能检测到10ng以下的DNA条带.仅用于科研试验。
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