小鼠 淋巴细胞分离液试剂盒 P8860
  • 品牌:Solarbio
  • 产地:北京
  • 货号:P8860
  • 价格: ¥询价
  • 发布日期: 2020-04-15
  • 更新日期: 2024-06-21
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产地 北京
品牌 Solarbio
货号 P8860
用途 本品易感染细菌,需无菌条件下操作。
纯度 现询客服%
规格 200ml/KIT
是否进口

保存18-25℃保存,有效期2年。本品易感染细菌,需无菌条件下操作。无菌条件下操作,启封后置于常温保存。如4℃保存,本分离液易出现白色结晶,影响分离效果。

试剂盒内容:

样本稀释液       200mL

清洗液          200mL

*组织淋巴细胞分离液      200mL


淋巴细胞分离方法

1.        制备*的单细胞悬液。

2.        取一支适当的离心管,加入与*单细胞悬液等量的分离液(分离液最少不得少于3 mL,总体积不能超过离心管的三分之二,否则会影响分离效果)。

3.        小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上,注意保持两液面界面清晰。(可以使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液,然后小心的平铺于分离液上,因为两者的密度差异,将形成明显的分层界面。)

4.

5.        离心后,此时离心管中由上至下细胞分四层。第一层为稀释液层;第二层为环状乳白色淋巴细胞层;第三层为透明分离液层;第四层为红细胞层。

6.        用吸管小心吸取第二层环状乳白色淋巴细胞至另一洁净的15mL离心管中,向离心管中加入10ml细胞洗涤液洗涤白膜层细胞,250g,离心10min。

7.        弃上清,5mL的PBS或细胞清洗液重悬细胞,250g,离心10min。

8.        重复步骤7

9.        弃上清,细胞重悬备用。

分层示意图

*单细胞悬液的制备方法

*研磨的方法:

1.        无菌条件下摘取*,撕去*被膜,用眼科剪将*剪成小块。

2.        将尼龙筛网或者是细胞过滤筛放置于平皿上,加入少量全血及组织稀释液(保证*及获得的细胞处于液体环境中)。

3.        将*放置于筛网上,使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨*(尽量控制研磨力度,保持筛网悬空,避免在皿底上直接研磨而造成大批细胞死亡)

4.        研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网,收集细胞悬液,再经滤网过滤。

注:

A.      可用酶消化法,使用胶原酶对*组织进行消化,得到单细胞悬液。

B.       如果最终得到的细胞需要培养,那全过程所需试剂与器材均要求无菌。

C.       根据*的体积控制单细胞悬液的浓度在108~109个/mL。

注意事项:

A.      开封前颠倒混匀,本分离液为无菌产品,为延长分离液保存时间,请在无菌条件下启封,避免微生物污染。

B.       分离液使用时应始终保持室温(18~25),如室内温度较低,可将分离液预热。4或者是温度较低的条件下离心,可能会导致白膜层中红细胞污染加重。

C.       待分离的组织要求新鲜,避免冷冻和冷藏。

D.      部分塑料制品(如聚苯乙烯)因其带有的静电作用,可能会导致细胞挂壁,影响分离效果。

如果要进一步对分离的细胞进行培养,那在制备单细胞悬液和分离过程中,注意无菌操作,避免微生物污染。


参考文献:

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