“社交悍匪”图鉴
处理方法
“社交悍匪”来袭
同学A：家人们谁懂啊，细胞比我先实现了"共同富裕"——培养基里面混进了不请自来的"室友"，显微镜下那突如其来密密麻麻的黑点到底是什么啊?!
同学B：本来心情好好的，一打开培养箱，天塌了，还我清澈的培养基，那浑浊的液体是闹哪样啊?!
同学C：这细胞咋开始变形了，也不爱增殖了，实验还能不能开始了?!
如果看到这些你也会产生共鸣的话，OK，没错，“社交悍匪”——各种菌类入侵你细胞平静的生活了，细胞被动社交并接受“污染”这份令人感到bad的礼物，坏消息：细胞嘎了，好消息(自我安慰版)：意外的对照组出现了。
“社交悍匪”图鉴
①细菌：入室抢劫型社交
完全不讲武德，热爱团建，全面入侵。
?污染速度：爆发性污染，通常24-48h就能看到明显变化，培养基可见明显浑浊，多伴有腥臭味；
?镜下特征：黑色细沙状/杆状，小而密且分布相对规则的菌体，偶见菌体运动，细胞状态变差，严重时漂浮死亡；
?处理：首先选择灭菌丢弃。若细胞珍贵且污染程度轻可尝试挽救。
1）物理冲洗：贴壁细胞弃培养基，使用PBS润洗细胞3-5次，每次10-20s，除去游离菌；
2）高浓度抗生素冲击：可先用20×双抗浸泡细胞5min(若担心损伤细胞，可以省略浸泡步骤)，再更换含有10×浓度双抗的完全培养基，将细胞放回培养箱培养12-24h；
3）恢复正常培养：冲击结束后，若污染有改善，恢复含1X双抗的培养模式，无改善丢弃细胞。
图1.细菌污染典型图片(图片源自客户真实培养案例)
② 真菌：优雅社交
真菌比较有格调，来的不紧不慢，喜欢在培养基进行艺术创作。
?污染速度：早期培养基清亮无变化，一般3天左右可在液面、瓶壁或底部肉眼观察到霉斑或者絮状物。
酵母菌：白色/乳白色小颗粒或“酵母粉”样沉淀，可形成黏液膜；
丝状霉菌：白→绿→黑的“绒毛”“蜘蛛网”或絮状菌落。
?镜下特征：酵母型真菌污染物，卵圆形或短杆状，常“出芽”形成典型“母子”或短链；霉菌污染镜下可见细长、分支的菌丝纵横穿插，菌丝呈丝状、管状、树枝状等。
?处理：首先选择丢弃，并对环境进行消杀。贵重或不可再生株可尝试早期抢救，隔离培养物，使用两性霉素B/制霉菌素等药物测试。
图2.真菌污染典型图片(图片源自客户真实培养案例)
③支原体：阴暗型社交
在看似正常的过程中悄然实施破坏大计。
?判别要点：细胞状态突然变差，增殖缓慢，甚至形态改变，拉丝或漂浮生长，但培养基无变化，细胞间隙有时可看见不运动的黑点。
?鉴定方式：肉眼及镜下均无法检测到支原体的存在，必须借助试剂鉴定，推荐PCR法、显色法、荧光染色法等相关检测试剂盒。
?处理：较轻污染或珍贵细胞可用商用支原体清除剂尝试挽救，一般周期2周左右，注意与其他培养物隔离，污染较重或清除剂无效立即弃掉且清除大环境。
图3.支原体污染典型图片(图片源自客户真实培养案例)
④黑胶虫：薛定谔社交
身份扑朔迷离，出现后会像线面一样繁殖。
?判别要点：培养基不浑浊，镜下观察，细胞周围及培养液可见黑色的小点，原地打转。随着细培养时间的延长“小黑点”逐渐增多，更换培养液或洗涤细胞不能将其去除。细胞耗能明显变快，但增殖较慢，状态亦会变差，严重时死亡。
?处理：较轻污染且细胞状态尚可时，使用黑胶虫清除剂抑制污染，直至细胞状态恢复，污染较重或清除剂无效立即弃掉且清除大环境。
如何阻止你的细胞“社交过度”？
无菌无菌无菌，重要的事情说三遍！！！
??不戴手套碰试剂，不换细胞间专用实验服，更有big胆者炫水炫零食。
??枪头倒吸不处理，还到处戳戳。
??高压灭菌的衣服或试剂不烘干就放回细胞房。
??酒精时刻喷一切，喷手喷台喷试剂。
??试剂分装且单独分配到人，不混用，不倒回。
??定期查岗：水浴锅月月换新，培养箱水盘常关注，超净台滤网要更换，环境清洁勤安排，支原体检测切勿忘。
致所有在细胞房奋斗的家人们：
我们养的不只是细胞，是耐心、是细心、是面对培养基异常时那颗强大的心脏。
愿你的细胞永远社恐，拒绝一切无效社交。
愿你的实验永远顺利，数据漂亮到能发CNS
