细胞冻存
“冬眠”指南
- SOLARBIO-
为什么把细胞“冻起来”
01防老化
SOLARBIO长期传代细胞细胞容易老化，甚至表型改变，导致实验数据难以复刻。因此细胞在短期/长期不使用时，冻存是最佳储存方式，同时还能节约培养试剂及耗材。
02防污染
SOLARBIO霉菌、支原体、细菌虎视眈眈，操作或者环境一个没注意，细胞可能就要和你说拜拜，而冻存就等于把细胞送进"防空洞"。
03防意外
SOLARBIO培养箱断电断二氧化碳细胞嘎掉了，没来得及接种细胞就不小心被当废液给倒了，新手操作不熟练细胞被酒精灯烤死了等等，面对这些大无语事件，冻存管里那管"火种"就是你翻盘的最后希望。
冻存是细胞的"时间胶囊"
是实验人的"后悔药"
冻存四部曲
细胞状态确认
“冷宫”不是谁想进，说进就能进。
合格细胞的三项硬指标：
l 对数生长期：
80%-90%汇合度、活力四射、正值分裂期的细胞。
l 高活力：
细胞活率大于90%。
l 无污染：
细菌、真菌、支原体、黑胶虫退！退！退！
什么细胞不能冻？
l 细胞满到没缝了，甚至成片漂起来的。
（细胞平台期，停止增殖）
l 刚复苏就冻存。
（状态还没稳，至少稳定传代个1-2次）
l 过度消化。
（吹得时候都见到白色絮状物了，状态受损）
l 细胞形态明显异常，增殖速度突然缓慢。
（警惕污染）
新获得的细胞株要在传代早期
就冻存保种，建议10代内完成
冻存液选择
细胞怕的不是冷，而是冰晶形成带来的毁灭性伤害。
冻存液的核心任务：让细胞在降温时慢慢脱水，别结大冰渣子。
经典配方（绝大部分细胞通用）
“90% FBS + 10% DMSO”，对于免疫类细胞，可适当提高血清浓度至92%。
经济适用版（推荐皮实型细胞）
“10% DMSO +40%完全培养基+50% FBS”组合，性价比高，但保存效果略差于经典血清加DMSO组合。
进阶版
商业化无血清冻存液：尤其适用于无血清体系培养的细胞。
冻存密度
冻太少了：复苏后稀稀拉拉，养半个月才能传代。
冻太多了：冻存液不够用，细胞互相压死，DMSO毒性叠加。
冻存需有度，拿捏请看下表
索莱宝冻存建议
|
容器 |
1.8-2mL冻存管 |
|
推荐冻存体积 |
1mL |
|
推荐冻存体积 |
2~5×10?个/mL： 绝大多数哺乳动物细胞 |
|
5~10×10?个/mL： 免疫细胞 |
细胞培养老手推荐：
1个T25冻存1只，1个10cm皿冻存2只
冻存流程
一步一步进入“冷宫”。
Step 1：收集对数期细胞
轻柔吹打，温和离心（1000-1200 rpm，5min），注意，细胞是去冬眠的，不是去殉职的哦！
Step 2：重悬分装，快准狠
调整适宜密度，使用冻存液重悬细胞，均匀分装到冻存管。
注意冻存液现用现配或使用商业化试剂均可，若含有DMSO成分，因具有一定毒性，加入后切勿在室温放置太久，加好建议立即转移冻存！
Step 3：标记——细胞"身份证"建立
细胞名称、冻存日期、冻存代数，都是后续认亲铁证！
Step 4：降温——细胞的"入睡仪式"
理想速度：-1℃/min，直至-80℃，然后转移进液氮长期保存。
科研不易，冻存且珍惜！
|
方法 |
操作 |
幽默评价 |
|
异丙醇冻存盒 /程序降温盒 |
管子放进去 直接扔-80℃ |
懒人神器来的 |
|
4℃ → -20℃ → -80℃ |
20min →1-2h →过夜 |
经典永流传 |
|
直接扔-80℃ |
简单粗暴，先决 条件一定是所用 商业化冻存液明确 说明可以这样操作 |
看好先决条件 不然细胞醒来 会写遗书 |
结语：细胞冻存四部曲，说到底是
选对细胞、配好液、调准数、控好温
