总RNA提取试剂盒

总RNA提取试剂盒说明

试剂盒内容：

操作步骤： 
1. 样品处理： 
 a. 植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg 组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml 裂解液中混匀。 
 b. 动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg 组织加1ml 裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。 
 c. 贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每10⁶细胞加1ml  裂解液。用取样器吹打混匀。 
 d. 细胞悬液：离心收集细胞。每10⁶动物、植物和酵母细胞或每10⁷细菌细胞加1ml 裂解液混匀。 
 e. 血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3 倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10 分钟，10000rpm离心1 分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2 倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml 裂解液混匀。 
2. 将处理后的样品在室温放置5 分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。 
3. 向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。 
4. 2-8℃ 12000 rpm 离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。 
5. 吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul  洗柱液，室温放置2分钟，2-8  12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。 
6. 第4 步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2 分钟，2-8  12000rpm ℃ 离心2min，弃废液。 
7. 向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8  12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。 
8. 向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8  12,000 rpm ℃ 离心2min，弃废液。 
9. 12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。 
10.  将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O ，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA

注意事项： 
1 ，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。 
2 ，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9 之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。

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