小鼠肿瘤坏死因子-a ELISA试剂盒

产品编号#：SEKM0034

适用于小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本

样本收集及储存：

1. 1. 细胞培养上清：

将细胞培养基移至无菌离心管，在4℃条件下1000×g离心10 min,然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），避免反复冻融。

1. 2. 血清样本：

室温血液自然凝固20 min后，在4℃条件下1000×g离心10 min，然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。

1. 3. 血浆样本：

将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合20 min，在4℃条件下1000×g离心10 min，然后将上清等量分装于小EP管并于-20℃下保存（24小时内检测可放入2-8℃储存），避免反复冻融。

结果判断：

1.用酶标仪 450 nm 波长测定 OD 值。选择双波长检测，参考波长为 630 nm。如不能进行双波长检测，请用 450 nm 的OD测定值减去630 nm的OD测定值。

2.计算标准品、样品的平均OD值：每个标准品和标本的OD值应减去零孔的OD值

3.以标准品浓度为横坐标，吸光度OD值为纵坐标，用软件绘制标准曲线，样品中TNF-a含量可通过对应OD值由标准曲线换算出相应的浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应做适当稀释后重新检测，计算浓度时再乘以稀释倍数。

参数表征：

1. 数据及标准曲线

2. 灵敏度：

*可检测小鼠TNF-a浓度达15pg/ml，

20个零标准品浓度OD的平均值加上两个标准差，计算相应的可检测浓度。

3. 特异性：

不与小鼠G-CSF 、GM-CSF、IL-1α、IL-1β、IL-2、3、5、6、7、9等反应，人的TNF-α、TNF sRI、TNF sRII等反应

4. 重复性：

板内，板间变异系数<10%

5. 回收率：

在选取的健康小鼠血浆、细胞培养上清中加入 3 个不同浓度水平的小鼠TNF-a，计算回收率。

6. 线性稀释：

分别在选取的4 份健康小鼠血浆和细胞培养上清中加入高浓度小鼠 TNF-a，在标准曲线动力学范围内进行稀释，评估线性。