小鼠白细胞介素-21ELISA 试剂盒
产品编号#：SEKM-0022
适用于小鼠血清、血浆或细胞培养上清液等样本

背景介绍：
白介素 21 是最近命名的 I 型细胞因子，由活化的 CD4+ T 细胞合成，与 IL-2、IL-4、和IL-15 高度同源，通过 IL-21R 介导多种生物学效应。IL-21 在特定的刺激物存在时，可促进 B、T 细胞增殖，促进骨髓祖细胞转化为 NK 细胞，并使其细胞毒性增加。IL-21 可促进 NK 细胞分化并表达 CD16 分子，IL-21 可增强抗原特异性 T 细胞的细胞毒活性，增强抗 CD3 抗体活化的 T 细胞的抗肿瘤作用。Th2 细胞分泌的 IL-21 可抑制 Th1 细胞合成 IFN-γ ,从而调节Th1 和 Th2 细胞平衡。小鼠 IL-21 的基因定位于 3 号染色体。小鼠 IL-21 的 cDNA 编码 146aa多肽前体，去除 24aa 的信号肽，形成 122aa 成熟肽，与人 IL-21 有 57%同源性，两者编码的 a 螺旋 A、D 区域高度保守，该区域在与其他因子受体相互作用中发挥重要作用。

检测原理：
Solarbio (Solarbio ®)ELISA 试剂盒采用基于双抗体夹心法的酶联免疫吸附检测技术。将抗小鼠 IL-21 单克隆抗体包被在酶标板上；分别加入梯度稀释的标准品和预稀释的样本，标准品和样本中的小鼠 IL-21 会与酶标板上的包被抗体充分结合；洗板后加入生物素化抗小鼠 IL-21抗体，该抗体会与板子上包被抗体捕获的标准品和样本中的小鼠 IL-21 发生特异性结合；洗板后加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，生物素与链霉亲和素会发生高强度的非共价结合；洗板后加入显色剂底物 TMB，若反应孔中样品存在不同浓度的小鼠 IL-21，则HRP 会使无色 TMB 变成不同深浅（正相关）的蓝色物质，加入终止液后反应孔会变成黄色；*，在 λmax=450nm（OD=450 nm）处测定反应孔样品吸光度（OD），样本中的小鼠 IL-21浓度与 OD 成正比，通过绘制标准曲线和四参数拟合软件便可计算出样本中小鼠 IL-21 的浓度。

注意事项：※※※
1. 试剂盒应在有效期内使用，请不要使用过期的试剂。
2. 试剂盒未使用时应保存在 2-8℃冰箱，已复溶但未用完的标准品，请丢弃。
3. 试剂盒使用前请在室温恢复 30min，且充分混匀试剂盒里的各种成份及制备的样品。
4. 在试验中标准品和样本建议作复孔检测，且加入试剂的顺序应保持一致。
5. 为避免交叉污染，请在试验中使用 1 次性试管，枪头，封板膜（※）及洁净塑料容器。.
6. 浓缩生物素化抗体和浓缩酶结合物的体积较少，在运输过程中微量液体会沾到管壁及瓶盖上，使用前请离心处理（5-10 S 即可），使管壁上的液体集中在管底部，取用时，请用移液器小心吹打几次。
7. 除了试剂盒中的浓缩洗涤液和终止液可以通用外，请不要使用其他来源试剂盒内含的试剂代替本试剂盒中的某单个组分。
8. 为保证结果准确，每次检测均需做标准曲线。

安全提示：试剂盒中的终止液为酸性溶液，操作人员在使用时请带上手套并注意防护；在操作过程中也要避免试剂接触皮肤和眼睛，如果不慎接触，请用大量清水清洗；检测血液样本及其它体液样本时，请按国家生物实验室安全防护有关管理规定执行。

自备实验器材（不提供，可代购）
1． 酶标仪（主波长 450nm，参考波长 630nm）
2． 高精度移液器及一次性吸头：0.5-10,2-20,20-200,200-1000μl
3． 洗板机或洗瓶
4． 37℃孵育箱
5． 双蒸水，去离子水，量筒等
6． 稀释用聚丙烯试管
样本收集及储存：
1. 细胞培养上清：
将细胞培养基移至无菌离心管，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min,然后将上清等量分装
于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。
2. 血清样本：
室温血液自然凝固 20 min 后，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小 EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），保存过程中如有沉淀，请再次离心，避免反复冻融。
3. 血浆样本：
将全血收集到含抗血凝剂的管中，根据标本的实际要求选择 EDTA，柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂，混合 20 min，在 4℃条件下 1000×g 离心 10 min，然后将上清等量分装于小EP 管并于-20℃下保存（24 小时内检测可放入 2-8℃储存），避免反复冻融。

※注意：血清血浆样本避免使用溶血、高血脂样本，以免影响检测结果；如果样本中的靶标物检测浓度高于标准品的*值，请将样品做适当倍数稀释后检测，建议正式实验前做预实验以确定稀释倍数。