产品名称：己糖激酶(HK)活性检测试剂盒  微量法

产品英文名：Micro Hexokinase(HK) Assay Kit

产品货号：BC0745             产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格：100管/96样           产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：1270
库存状态：现货                          
关键字：己糖激酶试剂盒|活性检测试剂盒|己糖激酶活性检测|试剂盒|微量法

简要介绍：
HK广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
 HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH ，NADPH 在340nm有特征吸收峰。

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体20mL×1 瓶， 4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1 支，-20℃保存；
产品说明：
HK广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是葡萄糖分解过程中的第一个关键酶，催化葡萄糖转化为6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖是糖酵解和磷酸戊糖途径的交叉点。
HK催化葡萄糖合成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖脱氢酶进一步催化6-磷酸葡萄糖脱氢生成NADPH ，NADPH 在340nm有特征吸收峰。
试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV板）、研钵、冰。
操作步骤：
一、样品测定的准备：   

1. 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500-1000:1 的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

3. 血清（浆）样品：直接检测。

二、测定操作：

1. 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。

2. 样本测定

（1）在试剂二中加入18mL 试剂一充分溶解，置于37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min；用不完的试剂4℃保存一周；
（2）在试剂三中加入1mL 试剂一，充分溶解待用；用不完的试剂4℃保存一周；
（3）在微量石英比色皿或96 孔板中加入180μL 试剂二、10μL 试剂三和10μL 样本，混匀，立即记录340nm 处20s 时的吸光值A1，比色后迅速将比色皿或酶标板连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴或恒温箱中，准确反应5分钟；迅速取出比色皿并擦干，340 nm下比色，记录5分20秒时的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
注意事项： 
1、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
2、*两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
3、不同匀浆组织中HK 活力不一样，做正式试验之前请做1-2 只预试，若ΔA>0.5，则说明组织活力太高，必须用提取液稀释成适当浓度匀浆上清液（计算公式中乘以相应稀释倍数），或缩短反应时间至2min,使ΔA<0.5，以提高检测灵敏度。
HK活性计算：   
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1. 血清（浆）HK 活性

单位的定义：每毫升血清（浆）在每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=643×ΔA

2. 组织、细菌或细胞中HK 活性

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=643×ΔA÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

单位的定义：每g 组织每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 样÷V 样总) ÷T=643×ΔA÷W

3. 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=1.286×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；
V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
b.用96 孔板测定的计算公式如下

1. 血清（浆）HK 活性

单位的定义：每毫升血清（浆）在每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/mL）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=1071.7×ΔA

2. 组织、细菌或细胞中HK 活性

1. 按样本蛋白浓度计算

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/mg prot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=1071.7×ΔA÷Cpr

2. 按样本鲜重计算

单位的定义：每g 组织每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/g 鲜重）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总) ÷T=1071.7×ΔA÷W

3. 按细菌或细胞密度计算

单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol 的NADPH 定义为一个酶活力单位。
HK（U/10⁴ cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=2.143×ΔA
V 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：NADPH 摩尔消光系数，6.22×10³ L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.6cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间，5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

相关文献：
《Effects of validamycin in controlling Fusarium head blight caused by Fusarium graminearum: Inhibition of DON biosynthesis and induction of host resistance》 作者:Jing Li，Yabing Duan，Chuanhong Bian，Xiayan Pan，Chengjie Yao，Jianxin Wang，Mingguo Zhou 期刊:Pesticide Biochemistry and Physiology 影响因子:2.87 PMID:30744889
《Galangin and Pinocembrin from Propolis Ameliorate Insulin Resistance in HepG2 Cells via Regulating Akt/mTOR Signaling》 作者:Yinkang Liu, Xiali Liang,Gensheng Zhang,Lingjie Kong,Wenjun Peng and Hongcheng Zhang 期刊:Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 影响因子:1.984 PMID:30420897

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