产品内容：

 提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：粉剂×1 支，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水充分溶解。 试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。

产品说明：

 胰蛋白酶选择性水解变性蛋白质中由赖氨酸或精氨酸的羧基所构成的肽链，是一种重要的消化 酶。此外，胰蛋白酶还广泛应用于脓胸、血胸、外科炎症、溃疡、创伤性损伤等所产生的局部水肿、 血肿及脓肿等的辅助治疗。 胰蛋白酶催化水解 BAEE 的酯键，生成 BA，BA 在 253nm 处有吸收峰，通过测定 253nm 吸光 度增加速率，即可计算出胰蛋白酶的活性。

自备仪器和用品：

 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤： 

一、粗酶液提取： 称取约 0.1g 样品，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆，10000 rpm 4℃离心 10min，取上清液，即 粗酶液，置冰上待测。或者直接称取 1mg 酶粉，加 1mL 提取液，充分混匀后置冰上待测（为保证 实验的准确性建议梯度稀释）。

 二、测定： 1. 分光光度计预热 30 min 以上，调节波长到 253 nm，蒸馏水调零。 2. 工作液的配制：将试剂一与试剂二按 2:97 配置工作液，按需配制，并置于 37℃水浴预热 30min 以上。 3. 空白管：取 1mL 石英比色皿，加入 990μL 工作液，再加入 10μL 蒸馏水，混匀，迅速于 253nm 测定 0s 和 60s 的吸光度，分别记为 A1、A2，△A 空白=A2-A1。 4. 测定管：取 1mL 石英比色皿，加入 990μL 工作液，再加入 10μL 粗酶液，混匀，迅速于 253nm 测定 0s 和 60s 的吸光度，分别记为 A3、A4，△A 测定=A4-A3。

注意事项： 实验前用 1～2 个样做预实验，保证吸光值变化在 0.01～0. 15 之间

相关文献：

《Long noncoding RNA ENST00000413528 sponges microRNA‐593‐5p to modulate human glioma growth via polo‐like kinase 1》 作者:Ren Zhang，Ruo‐Lun Wei，Wei Du，Li‐Wei Zhang，Tao Du，Ya‐Dong Geng，Xin‐ting Wei 期刊:CNS Neuroscience & Therapeutics 影响因子:4.458 PMID:30924320