测定意义： 

 镁是多种酶的激活剂，如磷酸酶、肌酸激酶、己糖激酶和羧化酶等。镁也是组成DNA、RNA及核糖体大分子结构所必需的元素。镁是维持正常神经和肌肉功能的重要元素。血清镁浓度偏离正常值，与某些*和内分泌疾病等相关。

测定原理：镁离子在碱性介质中氢氧化成胶体粒子，进一步与达旦黄结合后呈橘红色，在一定范围内，540nm吸光度与镁离子浓度成正比。

需要的仪器，耗材:可调式移液枪、可见光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、和蒸馏水。                         

产品内容： 

试剂一：液体 60mL×2 瓶，4℃保存； 试剂二：液体 2mL×1 瓶，4℃保存； 试剂三：粉剂×1 瓶，-20℃保存，临用前加入 20mL 试剂一； 试剂四：粉剂×1 支，-20℃保存，临用前加入 1.5mL 试剂二； 标准品：液体 0.5mL×1 支，4℃保存。10umol/mL 谷氨酸标准品。

产品说明：

 Glu 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，不仅是组成蛋白质的 20 种氨基酸之一，而 且通过转氨基作用参与多种氨基酸合成，是生物体内主要氨基来源之一。此外，Glu 还是味精的主 要有效成分，常用做食品添加剂以及香料生产。 谷氨酸脱氢酶（GDH）催化谷氨酸和 NAD 生成α-酮戊二酸、NADH 和 NH4+，引起 340nm 处吸 光度的上升，通过测定 340nm 吸光度的变化，计算谷氨酸含量。

操作步骤：

 一、谷氨酸提取： 细菌、细胞或组织样品：收集细胞或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每 500 万细菌或细 胞加入 1mL 试剂一，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）， 10000rpm， 常温离心 10min，取上清待测。 称取约 0.1g 组织，加入 1mL 试剂一进行冰浴匀浆，10000rpm，常温离心 10min，取上清待测。

 二、测定步骤 1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。 2、标准溶液的制备 将标准品分别稀释为 0.625、0.313、0.156、0.078、0.039μmol/mL 的标准溶液。 3、在有盖 EP 管中加入下列试剂： （1）标准管：在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 40μL 标准溶液、160μL 试剂三和 10μL 试 剂四混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值为 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2，计算?A=A2-A1。 （2）测定管：在微量石英比色皿/96 孔 UV 板中加入 40μL 样本、160μL 试剂三和 10μL 试剂四 混匀，立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值为 A1 和 5min20s 时的吸光值 A2，计算?A=A2-A1。
三、谷氨酸含量计算：

 1、标准曲线的绘制： 以谷氨酸含量（μmol/mL）为 x 轴，标准管?A 为 y 轴，绘制标准曲线 y=kx+b。将测定管?A 带 入方程得到 x 值。

 2、氨基酸含量计算： （1）按照蛋白浓度计算 谷氨酸含量（μmol/mg）=x×V 样本÷（Cpr×V 样本）=x÷Cpr。 （2）按照样品鲜重计算 谷氨酸含量（μmol/g 鲜重）=x×V 样本÷（W÷V 样总×V 样本）=x÷W。 （3）按照细菌或细胞数量计算 谷氨酸含量（μmol/104 cell）＝x×V 样本÷（500÷V 样总×V 样本）=0.002x。 V 样总：加入提取液体积， 1mL；V 样本：加入的样本体积， 0.04mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL； W：样本鲜重，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意事项： 为提高检测灵敏度，测定管的吸光值应小于 1 且?A 小于 0.4，若大于此值则需要将上清液用试 剂一稀释至适当倍数后测定。

相关文献：

《Leveraging Atriplex hortensis choline monooxygenase to improve chilling tolerance in cotton》 作者:Yanan Wang，Chengzhen Liang，Zhigang Meng，Yanyan Li，Muhammad Ali Abid，Muhammad Askari，Peilin Wang，Yuan Wang，Guoqing Sun，Yongping Cai，Shou-Yi Chen，Yi Lin，Rui Zhang，Sandui Guo 期刊:Environmental and Experimental Botany 影响因子:3.712 PMID:

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