非蛋白巯基测定试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
英文名称：Non-protein thiol content detection kit
产品商标：solarbio
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：150
库存状态：现货
关键词：非蛋白质巯基|非蛋白质巯基检测|非蛋白质巯基测定
测定意义
生物体内巯基主要包括非蛋白质巯基和蛋白质巯基。巯基化合物在体内具有重要的解毒功能，对生物体的自我调节具有非常重要的生理意义。

测定原理
巯基基团与 5,5’- 二硫代-双-硝基ben甲酸（DTNB）反应，生成黄色化合物，在 412nm 处有*吸收峰。

自备实验用品
天平、研钵、可见分光光度计、恒温水浴锅、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水，甲醇。

试剂组成和配制
提取液：液体 50 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 40 mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 3 mL×1 瓶，4℃避光保存。

样品的制备
1. 动物、植物组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入 1mL 提取液）进行冰浴匀浆，然后加入 4mL 甲醇，室温震荡 10min，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
3. 血清、培养液：取 0.1mL，加 0.4mL 甲醇，室温震荡 10min，然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。

操作步骤
对照管      测定管
样品（μL）     200         200
试剂一（μL）   750         750
试剂二（μL）                50
H2O（μL）      50
混匀，25℃静置 10min， 1cm 光径玻璃比色皿，双蒸水调零，测定 412nm 吸光值，ΔA=A 测定-A对照。
计算公式
标准曲线：y = 1.7236 x，R2 = 0.9994
1. 组织：
非蛋白质巯基含量（μmol/g）=1.7236A×V 反总÷ (V 样÷V 样总×W) ×5=14.5×ΔA÷W
2. 血清、培养液：
非蛋白质巯基巯基含量（μmol/L）=1.7236A×V 反总÷V 样×5×103=14500×ΔA
3. 细胞：
非蛋白质巯基含量（μmol/104）=1.7236A×V 反总÷ (V 样÷V 样总×细胞数量) ×5=14.5×ΔA÷细胞数量

V 反总：反应总体积，1mL；
V 样：反应中样品体积，0.2mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样品质量，g；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
103 ：1mmol/ L=103μmol/ L

注意事项
*检出限为 10μ mol/L。