原果胶含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Original pectin content test kit
关键词：原果胶含量|原果胶|原果胶含量检测|原果胶含量测定
货号：BC3685
规格：100T/48S

产品内容：
提取液一：液体 110mL×2 瓶，4℃保存。
提取液二：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：浓硫酸 25mL，自备。
试剂二：液体 3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
标准品：粉剂×1 支，10mg 半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入 0.943mL 提取液二，配成 50μmol/mL的标准液

产品说明：
果胶是植物细胞壁主要组成成分之一，分为水溶性果胶和不溶性果胶，不溶性果胶为原果胶。
原果胶是不溶于水的物质，但可在酸、碱、盐等化学试剂及酶的作用下，加水分解转变成水溶性果胶，在食品、纺织、印染、烟草、冶金等领域具有较广泛的应用。
原果胶在稀酸中水解为可溶性果胶，并进一步转化为半乳糖醛酸，产物在强酸中与咔zuo缩合生成紫红色化合物，在 530 nm 处有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、浓硫酸、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器和蒸馏水。

操作步骤：
一、原果胶的提取：
将组织样品捣碎，按照样品质量(g)和提取液一体积(mL)为 1: 20 的比列（建议取约 0.05g 样品，加入 1mL 提取液一），置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，取出冷却后于 5000g、25℃离心 10min，去掉上清，沉淀中再加入 1mL 提取液一重复操作一次，离心后去上清，沉淀中加入 1mL 提取液二，置于 90℃恒温水浴锅中水解 1h，取出冷却后于 8000g、25℃离心 15min，取上清液待测。

二、测定步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 530nm，蒸馏水调零。
2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液二稀释为 2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表：
试剂名称     空白管 标准管 对照管 测定管
样本（μL）     -      -      25     25
标准品（μL）   -     25       -      -
蒸馏水（μL）  25     -        -      -
试剂一（μL）  200   200     200    200
混匀、90℃放置 10min，取出后冷却
试剂二（μL）    -     -       25    -
试剂三（μL）   25    25       -    25
混匀，25℃静置 30min 后吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或 96 孔板中，测定
530nm 处吸光值，分别记为 A 空白管、A 标准管、A 对照管和 A 测定管。△A 标
准=A 标准管-A 空白管，△A 测定=A 测定管-A 对照管。

三、原果胶含量的计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 测定带入方程得到 x（μmol/mL）
2、 原果胶含量的计算：
原果胶含量(μmol /g 鲜重)= x×V 提取液二÷W =x÷W
V 提取液二：加入提取液二的体积，1mL；
W：样本鲜重，g。

注意事项：
1、 浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热、冷却后再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
2、 若吸光值超过 1，可将样本提取液二进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。