植物叶绿素含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Plant chlorophyll content detection kit
关键词：植物叶绿素|植物叶绿素含量检测|植物叶绿素含量
货号：BC0995
规格：100T/96S

产品内容：
提取液：自备。将无水乙醇：丙tong（V：V）=1:2 混合待用。
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存。

产品说明：
植物叶绿素广泛存在于绿色植物组织中，是光合作用的细胞器。其含量与光合作用、营养状况密切相关，是反应植物生长状况的重要指标。
叶绿素 a 和叶绿素 b 在 645nm 和 663nm 处有*吸收，根据经验公式可计算得叶绿素 a 和叶绿素 b 以及总叶绿素的含量。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板（建议使用非聚苯乙烯材质的 96 孔板）、可调式移液枪、天平、研钵/匀浆器、锡箔纸、蒸馏水、无水乙醇和丙tong。

操作步骤：
一、样本制备：
1. 取新鲜植物叶片或其它绿色组织，用蒸馏水洗干净，然后吸干表面水分，去掉中脉，称取约 0.1g，剪碎放入研钵或匀浆器中。
2. 加入 1mL 蒸馏水，少量试剂一（约 10mg），在黑暗或弱光条件下充分研磨，转入 10mL 试管中。
3. 用提取液冲洗研钵，将所有冲洗液转入 10mL 管中，用提取液定容至 10mL，置于黑暗条件下或者包上锡箔纸浸提 3h，观察底部组织残渣颜色接近于白色则提取完全，若组织残渣未完全变白，继续浸提至组织残渣颜色接近于白色。
二、测定步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 645nm 和 663nm，分光光度计用提取液调零。
2、 取上层浸提液 200μL 于微量玻璃比色皿/96 孔板中（若使用聚苯乙烯材质的 96 孔板，请在 5min内尽快测定完成），测定 663nm 和 645nm 处吸光值，分别记为 A663和 A645 。
三、叶绿素的计算：
叶绿素 a 含量（mg/g 鲜重）=（21.2×A663–4.48×A645）×V 提×F÷W÷1000
= 0.01×（21.2×A663–4.48×A645）×F÷W
叶绿素 b 含量（mg/g 鲜重）=（38.2×A645–7.8×A663）×V 提×F÷W÷1000
= 0.01×（38.2×A645–7.8×A663）×F÷W
叶绿素总含量（mg/g 鲜重）=（33.7×A645 +13.4×A663）×V 提×F÷W÷1000
= 0.01×（33.7×A645 +13.4×A663）×F÷W
V 提：提取液体积，10mL；F：稀释倍数；W：样本质量，g

注意事项：
1、 叶绿素对光敏感，研磨和提取等操作尽量避光或者在弱光下进行。
2、 一定要浸提至组织残渣完全变白，否则提取不充分。
3、 用提取液冲洗研钵一定要冲洗至所有的绿色物质被转移至 EP 管。
4、 测定时吸光值超过 1，可进行适当稀释；当吸光值小于 0.05 时，可以适当减少 V 提取的用量，注意计算公式中改变 V 提取数值。
5、 若使用聚苯乙烯材质的 96 孔板进行测定，请在 5min 内尽快测定完成。

相关文献：

《SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses》 作者:Fu-Yuan Zhu,Mo-Xian Chen,Wai-Lung Chan,Feng Yang,Yuan Tian,Tao Song,Li-Juan Xi,Ying Zhou ,ShiXiao,Jianhua Zhang,Clive Lo 期刊:Journal of Proteomics 影响因子:3.537 PMID:30048775