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| 产地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 货号 | BC2110 |
| 保存条件 | 2-8℃保存 |
| 英文名称 | Vitamin B6 (VB6) content detection kit |
| CAS编号 | |
| 保质期 | 1年 |
维生素 B6 检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Vitamin B6 (VB6) content detection kit
关键词：维生素B6|维生素B6含量检测|维生素B6检测
货号：BC2110
规格：50T/24S
产品内容：
提取液：液体 18mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 20mL×1 瓶，4℃避光保存。 试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存，临用前加入 20mL 蒸馏水混匀，如果一次性用不完，可分 装于-20℃保存待用。
标准品：粉剂×1 支，10mg 维生素 B6，4℃保存。临用前加入 1mL 试剂一，配成 10mg/mL（即 10000μg/mL）的标准液。
产品说明：
维生素 B6（Vitamin B6）又称吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在体内以磷酸酯的形 式存在，是一种水溶性维生素，肉类、全谷类、蔬菜和坚果类中含量较高。在机体中参与多种蛋白 质和氨基酸的代谢，对生物体具有极其重要的作用。 VB6 与 4-氨基安替比林在强氧化剂作用下生成稳定的黄色化合物，在 400nm 有特征吸收峰。
实验室所需仪器和试剂：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、蒸馏水。
操作步骤：
粗酶液提取：
组织：将样品磨碎，按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加 入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清测定（动物组织及其他蛋白含量较高的样本建议离心 20-30 分钟或反复离心 2-3 次至 上清无混浊）。
细胞：按照细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加 入 0.6mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；加蒸 馏水 0.4mL，混匀后于 25℃，16000rpm 离心 10min，取上清测定。 液体：直接检测。
测定步骤：
分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 400nm，蒸馏水调零。
将 10mg/mL（10000μg/mL）标准液用试剂一稀释为 125、62.5、31.25、15.625、7.8125μg/mL 的标准溶液备用。
操作表：
在 1.5ml 离心管中依次加入下列试剂：
样品对照管 样品测定管 标准管 空白管 空白对照管
样品（μL） 200 200 - - -
试剂一（μL） - - - 200 200
标准溶液 （μg/mL） - - 200 - -
试剂二（μL） 200 200 200 200 200
试剂三（μL） 300 300 300 300 300
试剂四（μL） - 300 300 300 -
蒸馏水（μL） 300 - - 300
充分混匀，25℃反应 20min，测定 400nm 处吸光值，记为 A 样品测定管和 A 样品对照管、 A 空白管、A 空白对照管，△A=（A 样本测定管-A 样本对照管） （A 空白管- A 空白对照管）。 空白管、空白对照管只要做一管。
维生素 B6 含量计算：
标准曲线的绘制： 以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b， 将△A 带入方程得到 x（μg/mL）
维生素 B6 含量的计算：
按蛋白浓度计算 VB6（μg/mg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Crp）= x÷Cpr。
按样本质量计算 VB6（μg/g 鲜重）= x×V 提取÷W=x÷W 。
按照细胞数量计算 VB6（μg/104 cell）= x×V 提取÷细胞数量（万个）=x÷细胞数量（万个）
按液体体积计算 VB6（μg/mL）= x×V 提取÷V 提取= x
V 提取：提取液体积，1mL；
V 样：加入的样品体积，0.04mL；
Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；
W：样本质量，g。
注意事项：
A 大于 0.8 时，建议将样品用试剂一稀释后再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。
蛋白浓度较高的样品，比如动物组织、豆类种子等，若显色完成后有沉淀产生，将样本稀释后 再测定，在计算公式中乘以稀释倍数。
3、 显色完成后立即进行测定，尽量保证反应时间一致。
