维生素 E（VE）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Vitamin E (VE) content test kit
关键词：维生素E|维生素E检测|VE|VE检测
货号：BC1425
规格：100T/48S

产品内容：
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 3mL×1 瓶， 4℃避光保存；
试剂二：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；
试剂三：无水乙醇 2mL×1 瓶，自备，RT 保存；
试剂四：液体 7mL×1 瓶，4℃保存；
标准品：液体 20mg×1 支，-20℃避光保存。临用前加入 1 mL 无水乙醇，配成 20mg/mL 的标准品溶液。

产品说明：
维生素 E（Vitamin E）是一种天然脂溶性抗氧化剂，是最主要的抗氧化剂之一。能阻断机体不饱和脂肪酸的过氧化，维持不饱和脂肪酸细胞膜的完整性和正常功能，并可清除超氧阴离子自由基，具有延缓衰老、预防溶血性贫血等作用。
VE 还原 Fe3+为 Fe2+，Fe2+与 1,10-菲罗啉产生有色络合物，在 530nm 有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、天平、台式离心机、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、漩涡震荡仪、无水乙醇、EP 管。

操作步骤：
一、维生素 E 的提取：
组织：按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，匀浆后用提取液定至 1mL，定至在漩涡混匀仪上震荡 5min（充分抽提），于 25℃，5000g离心 5-10min，取上层测定。
细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）后在漩涡混匀仪上震荡 5min（充分抽提），于 25℃，5000g 离心 5-10min，取上层测定。
血清或其他液体：取 0.1mL，加 0.9mL 提取液，漩涡仪混匀上震荡 5min（充分抽提），于 25℃，5000g 离心 5-10min，取上层测定。

二、测定步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 530nm，无水乙醇调零。
2、 将 20mg/mL 标准液用无水乙醇稀释为 0.125、0.0625、0.03125、0.015625、0.008、0.004μg/mL的标准溶液备用。
3、 操作表：(在 1.5ml 离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)
对照管 测定管 标准管 空白管
样品（μL）      100    100    -      -
标准溶液（μL）   -      -     100     -
无水乙醇（μL）   -      -      -     100
试剂一（μL）    20     20     20     20
试剂二（μL）    -       20     20    20
试剂三（μL）    20      -       -     -
充分混匀，立即记时，25℃反应 5min
试剂四（μL）    60     60      60    60
充分混匀，将液体置于微量玻璃比色皿/96 孔板中，测定 530nm 处吸光值，记为 A 对照管、A测定管、A 标准管和 A 空白管，△A=A 测定管-A 对照管。计算△A=A 测定管-A 对照管，△A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。

三、维生素 E 含量计算：
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 带入方程得到 x（μg/mL）
2、 维生素 E 含量的计算：
（1）按蛋白浓度计算
VE 含量（μg /mg prot）=x×V 样÷（V 样×Cpr）=x÷Cpr。
（2）按样本质量计算
VE 含量（μg /g 鲜重）=x×V 样÷（V 样×W÷V 样总）=x÷W。
（3）按照细胞数量计算
VE 含量（μg /104
cell）=x×V 样÷（V 样×细胞数量（万个）÷V 样总）=x÷细胞数量（万个）。
（4）按液体体积计算
VE 含量（μg /mL）= x×V 样总÷V 液体=10x。

V 样：加入样本体积，0.01mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL；
W：样本质量，g；
V 液体：血清或其他液体体积，0.1mL。

注意事项：
1、 若反应体系产生沉淀，需要将样品进行适当的稀释，并在计算公式中乘以稀释倍数。
2、 若用微量玻璃比色皿检测，比色皿时需用无水乙醇冲洗，勿用蒸馏水以防出现分层影响试验数据。
3、 当△A 大于 0.7 时，建议将样本用无水乙醇稀释后再进行测定。