木质素含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Lignin content test kit
关键词：木质素|木质素含量检测|木质素含量
货号：BC4205
规格：100T/96S

产品内容：
试剂一：液体 34mL×1 瓶，4℃保存。每次用完用封口膜密封保存。
试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，50mg 木质素，4℃保存。临用前加入 1mL 高氯酸，充分混匀溶解，配成50mg/mL 的标准液。

产品说明：
木质素是构成植物细胞壁的成分之一，具有使细胞相连的作用。木质素存在于木质组织中，主要作用是通过形成交织网来硬化细胞壁，为次生壁主要成分。
木质素中的酚羟基发生乙酰化后在 280nm 处有特征吸收峰，280nm 的吸光值高低与木质素含量正相关。

试验中所需的仪器和试剂：
紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量石英比色皿/96 孔 UV 板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、EP 管、封口膜、高氯酸、冰乙酸和蒸馏水。

操作步骤：
一、样品处理：
样品 80℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛，称取约 3mg 于 1.5mLEP 管中。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 280nm，冰乙酸调零。
2、操作表：在 1.5ml 离心管中依次加入下列试剂：
测定管  标准管  空白管
样品（mg）    3       -       -
试剂一（μL）  300    300     300
高氯酸（μL）  12      -       12
标准液（μL）  -       12       -
封口膜密封，充分混匀。于 80℃水浴锅水浴 40min，进行乙酰化。每隔 10min 震荡一次，
然后自然冷却。
试剂二（μL）  300    300     300
充分混匀后于常温 8000g 离心 10min，取上清。
上清液（μL）  12      12      12
冰乙酸（μL）  588    588      588
测定 280nm 下的吸光值 A，记为 A 测定管、A 空白管、A 标准管，计算△A=A 测定管-A
空白管、△A 标准=A 标准管-A 空白管。


三、木质素含量计算：
C 标准=C 原液×V 标准÷V 乙酰化×V 上清÷V 检测=0.0196 mg/mL
木质素（mg/g）= △A÷（△A 标准÷C 标准）×V 检测÷（W×V 上清÷V 乙酰化）
= 0.5998×△A÷△A 标准÷W

C 标准：标准液在最终检测体系中的浓度，0.0196 mg/mL；
C 原液：标准液浓度，50mg/mL；
V标准：加入的标准液的体积，0.012mL；
V 乙酰化：乙酰化反应体积，0.612mL；
V 上清：上清液体积，0.012mL；
V 检测：检测反应总体积，0.6mL；
W：样本质量，g。

注意事项：
1、试剂一有毒性，请操作时做好防护措施，加热前必须用封口膜密封，以防气体溢出。
2、加热过程中有剧烈反应，震荡时轻摇，以免压力过大喷出造成人身伤害。
3、冰乙酸具有强刺激性，建议操作过程全部在通风橱内操作。
4、取上清加冰乙酸步骤根据自己样品乙酰化程度，冰乙酸的用量可调整，保证吸光值在 0.1-0.8 之间即可，并在公式中参与计算。