水土中总磷酸盐含量检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Test kit for total phosphate content in water and soil
关键词：水土中总磷酸盐|水土中总磷酸盐含量检测|
货号：BC4210
规格：50T/48S

产品简介：
总磷酸盐包含正lin酸盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、多聚lin酸盐等各种磷酸盐的形式，反应了水土中的磷酸盐水平，是一个水质和土壤质量评价的重要指标。
在酸性溶液中，在分解剂和高温条件下，将无机磷酸盐和有机磷酸盐水解成正lin酸盐，正lin酸盐可与钼酸铵反应成磷钼酸，在还原剂存在时被还原为磷钼蓝，在 660nm 处有特征吸收峰。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、天平、台式离心机、1mL 玻璃比色皿、可调式移液枪、20 目筛、漩涡震荡仪、EP 管、蒸馏水、浓硫酸。

产品内容：
试剂一：浓硫酸 10mL×1 瓶，自备。
试剂二：粉剂×2 瓶，4℃保存。每瓶临用前加入 15mL 蒸馏水溶解备用。
试剂三：液体 10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 10mL 双蒸水，溶解后 4℃保存一周。
试剂五：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加入 10mL 双蒸水，溶解后 4℃保存一周。
试剂六：液体 10mL×1 瓶，室温保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存。临用前加入 1.4mL 下述稀释液溶解粉剂，配成 20μmol/mL
的磷标准液稀释液的配制：按蒸馏水体积(mL)：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）=10:1:2 的比例混合即可，现用现配。

定磷试剂的配制：按 H2O：试剂四：试剂五：试剂六=2:1:1:1 的比例配制，配好的工作液应为浅黄色。若变色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染，工作液应现配现用。

注意：配试剂*用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。

操作步骤：
一、样本处理：
1. 水样：按照水样体积（mL）：试剂一体积（mL）：试剂二体积（mL）为 10:1:2 的比例（建议取 1mL 水样，加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二），用封口膜封口。95℃水浴 30min，冷却后待测。
2. 土样：（1）新鲜土样风干，过 20 目筛；（2）按照土壤质量（g）：蒸馏水体积(mL)：试剂一体积（V）：试剂二体积（V）=1:10:1:2（建议称取约 0.1g 土样，加入 1mL 蒸馏水，再加入 100μL 试剂一和 200μL 试剂二），用封口膜封口。95℃水浴振荡 30min，10000g ，25℃离心 10min，取上清液待测。
二、测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 660nm，蒸馏水调零。
2、 将 10μmol/mL 标准液用稀释液稀释为 0.625、0.3125、0.15625、0.078125、0.039、0.02μmol/mL的标准溶液备用。
3、 操作表：(在 1.5ml 离心管中依次加入下列试剂)
测定管   标准管   空白管
样品（μL）        100       -        -
标准溶液（μL）    -        100      -
试剂三（μL）      150       150     150
定磷试剂（μL）    500       500     500
蒸馏水（μL）      250       250     250
充分混匀，40℃静置 10min，反应完成后于 1mL 玻璃比色皿，测定 660nm 处吸
光值 A，分别记为 A 测定管、A 标准管和 A 空白管，△A=A 测定管-A 空白管，△A 标
准=A 标准管-A 空白管，空白管只需测一次。

总磷酸盐含量计算
1、 标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 带入方程得到 x（μmol/mL）
2、 总磷酸盐含量的计算：
土样总磷酸盐含量（μmol /g 土样）= x×V 样÷（V 样×W÷V 样总）=1.3x÷W。
水样总磷酸盐含量（μmol /mL 水样）= x×V 样总÷V 水样=1.3x。
V 样：加入样本体积，0.1mL；
V 样总：样本处理加到土样中的液体总体积，1.3mL；
W：样本质量，g；
V 水样：水样体积，1mL。

注意事项
1、 定磷试剂应现配现用，正常颜色为浅黄色，如有变色或变蓝则均为失效。
2、 加入试剂三后可能会产生絮状沉淀，其对后续实验无影响，加入定磷试剂后即自行消除。
3、 当△A 大于 0.8 时，建议将样本用稀释液稀释后再进行测定。