试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、天平、低温台式离心机、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、EP 管、蒸馏水、异丙醇。

产品内容：
提取液：异丙醇 100mL×1 瓶，自备，4℃保存；
试剂一：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 200μL×1 支，4℃保存；
试剂三：液体 30μL×1 支，4℃保存；
标准品：粉剂×1支，10mg胆固醇，4℃保存。临用前加入517μL提取液，振荡溶解，即为50μmol/mL
的胆固醇标准溶液。
工作液的配制：将试剂一：试剂二：试剂三按比例3mL：20μL：3μL配制工作液，现用现配。

操作步骤：
一、样本处理：
1. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL提取液）进行冰浴匀浆。10000g，4℃离心 10min，取上清置冰上待测。
2. 细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 2 秒，间隔 3 秒，总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接测定。
二、测定步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 500nm，蒸馏水调零。
2、 将 50μmol/mL 标准液用提取液稀释为 2.5、1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078μmol/mL 的标准溶液备用。
3、 操作表：(在离心管或 96 孔板中依次加入下列试剂)
测定管   标准管   空白管
样品（μL）        20       -         -
标准溶液（μL）    -       20        -
提取液（μL）      -        -        20
工作液（μL）      180     180       180
充分混匀，37℃静置 15min，反应完成后测定 500nm 处吸光值 A，分别记为 A测定管、A 标准管和 A 空白管，△A=A 测定管-A 空白管，△A 标准=A 标准管-A 空白管，
空白管只需测一次。

总胆固醇含量计算
一、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为 x 轴，其对应的△A 标准为 y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 带入方程得到 x（μmol/mL）
二、总胆固醇含量的计算：
1. 血清（浆）中 FC 含量计算：
TC 含量（μmol/dL）=x×100。
2. 组织中 FC 含量计算：
(1) 按样本蛋白浓度计算
TC 含量（μmol/mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）=x÷Cpr。
(2) 按样本鲜重计算
TC 含量（μmol/g 鲜重）=x×V 提取÷W= x÷W
3. 细胞、细菌中 TC 含量计算：
TC 含量(μmol/104cell)=x×V 提取÷500=0.002x。
100：1dL=100mL；
V 提取：加入样本的提取液体积，1mL；
W：样本质量，g；
500:500 万个细胞数量。

注意事项
当△A 大于 1.5 时，建议将样本用提取液稀释后再进行测定。

相关文献：

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《Long noncoding RNA lncARSR promotes hepatic cholesterol biosynthesis via modulating Akt/SREBP-2/HMGCR pathway》 作者:Jiabin Huang,Shangjun Chen,Dongliang Cai,Deqiang Bian,Fengling Wang 期刊:Life Sciences 影响因子:3.448 PMID:29678744