植物硝态氮含量检测试剂盒说明书
微量法
英文名称：Plant nitrate nitrogen content detection kit
关键词：植物硝态氮检测|植物硝态氮|硝态氮|硝态氮检测
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号: BC1505
规格:100T/48S
产品简介：
硝酸盐是植物吸收的主要含氮物质之一。硝酸盐在植物体内的还原部位不同, 可以在根内,也可以在枝叶内进行, 且因植物类别和环境条件而异。因此,测定植物体内硝酸氮含量变化对了解氮代谢机制有重要的意义。在浓酸条件下，NO3-可以与水杨酸反应，生成硝基水杨酸，后者在 PH>12 的条件下呈黄色，在一定范围内，其颜色深浅与含量成正比，可比色测定计算得硝态氮含量。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

产品内容：
试剂一：粉剂×2 支，4℃避光保存。临用前根据用量每支加入 0.5mL 浓硫酸充分溶解。
试剂二：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 瓶，4℃保存。10 mg 硝suan钾，临用前加入 0.935mL 蒸馏水溶解，配成 1400μg/mL的 NO3-N 标准液

操作步骤：
一、粗酶液提取：
按照质量（g）：蒸馏水体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 蒸馏水）加入蒸馏水，室温匀浆后置于 90℃恒温水浴锅中浸提 30min，期间不断晃动或者置于 90℃恒温摇床中振荡提取 30min，待冷却后于 25℃，12000g 离心 15min，取上清待测。

二、测定步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 410nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 将 1400μg/mL NO3-N 标准液用蒸馏水 50 倍稀释成 28μg/mL 的标准溶液。
3、 操作表：
试剂名称 测定管 对照管 标准管 空白管
样本（μL）8      8
标准溶液（μL）           8
蒸馏水（μL）     12            8
试剂一（μL）12    -       12   12
充分混匀，25℃静置 30min
试剂二（μL）280   280    280   280
混匀，涡旋振荡，使出现的沉淀充分溶解，取 200μL 于微量玻璃比色皿/96孔板中测定 410nm 处吸光值 A，计算△A=A 测定管-A 对照管，△A 标准=A 标准管-A空白管。
植物 NO3-N 的计算
1、 按样本鲜重计算
NO3- N 含量（μg/g 鲜重）=△A÷（△A 标准÷C 标准）×V 提取÷W=28×△A÷△A 标准÷W。
2、 按样本蛋白浓度计算：
NO3- N 含量（μg/mg prot）=△A÷（△A 标准÷C 标准）×V 提取÷（Cpr×V 提取）
=28×△A÷△A 标准÷Cpr。
W：样本质量，g；
C 标准：标准溶液浓度，28μg/mL；
V 提取：提取液体积，0.3mL；
Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL。
注意事项
1、 试剂一配制好后尽快使用，4℃可保存一周。
2、 试剂一和试剂二均具有强腐蚀性，操作时需做好防护措施。
3、 △A 大于 1 时，建议将样品稀释后再进行测定。

相关文献:

《SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses》 作者:Fu-Yuan Zhu,Mo-Xian Chen,Wai-Lung Chan,Feng Yang,Yuan Tian,Tao Song,Li-Juan Xi,Ying Zhou ,ShiXiao,Jianhua Zhang,Clive Lo 期刊:Journal of Proteomics 影响因子:3.537 PMID:30048775