植物氨态氮含量检测试剂盒说明书
微量法
英文名称：Plant ammonia nitrogen content detection kit
关键词：植物氨态氮检测|植物氨态氮|植物氨态氮检测测定|氨态氮
注意：正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC1525
规格：100T/96S
产品内容：
提取液：液体 120mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存，临用前将试剂三倒入使其充分溶解备用。该试剂溶解后 10 天内有效。
试剂二：粉剂×2 支，4℃避光保存。临用前加 1mL 蒸馏水充分溶解。
试剂三：液体 22mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，10mg 半胱氨酸，4℃避光保存。临用前加入 1.157mL 提取液，得到 1000μg/mL氮标准液

产品说明：
氮素是构成生物体的一种必需元素。铵态氮进入植物细胞后形成氨基酸或酰胺，植物组织氨氮含量可反映植物受胁迫的程度。
氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在 570 nm 有特征吸收峰；通过测定570 nm 吸光度，来计算氨基酸含量。

试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
按照质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，室温匀浆后于 25℃，12000g 离心 10min，取上清待测。
二、测定步骤：
1、 分光光度计/酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 570nm，分光光度计蒸馏水调零。
2、 将 1000μg/mL 氮标准液用提取液分别稀释为 200、100、50、25、12.5 μg/mL
3、 操作表：
试剂名称（μL） 测定管 标准管 空白管
样本              15      -      -
标准品            -       15      -
蒸馏水            -       -      15
试剂一            150     150   150
无水乙醇          150     150   150
试剂二            15       15    15
充分混匀后盖紧瓶盖封口膜封口（防止水分散失），置于沸水浴中保温 10 min，冷却后反复颠倒 EP 管数次，将测定管 8000rpm 离心 5min 后取上清，吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或者 96 孔板中，于 570nm 测定吸光值。显色后务必在 30min 内测完。计算△A=A 测定管-A 空白管，△A 标准=A标准管-A 空白管。
三、植物氨态氮含量计算：
1、标准曲线的绘制
以各个氮标准液为横坐标，其对应的△A 标准为纵坐标，建立标准曲线，得到标准方程 y=kx+b，将△A 带入方程中，得到 x (μg/mL)
2、NH3-N 含量的计算
（1）按样本鲜重计算
NH3-N 含量（μg /g FW）=x×V 提取÷W= x÷W。
（2）按蛋白浓度计算
NH3-N 含量（μg /mg prot）=x×V 提取÷（Cpr×V 提取）= x÷Cpr。
W：样品质量，g；
Cpr：蛋白浓度，mg/mL；
V 提取：样品提取液总体积，1mL。
注意事项：
1. 为保证实验结果的准确性，需先取 1-2 个样做预实验，如果测定的吸光值过高（0.6），用提取液稀释后再测定。

相关文献：

《SWATH-MS quantitative proteomic investigation of nitrogen starvation in Arabidopsis reveals new aspects of plant nitrogen stress responses》 作者:Fu-Yuan Zhu,Mo-Xian Chen,Wai-Lung Chan,Feng Yang,Yuan Tian,Tao Song,Li-Juan Xi,Ying Zhou ,ShiXiao,Jianhua Zhang,Clive Lo 期刊:Journal of Proteomics 影响因子:3.537 PMID:30048775