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产地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
货号 | BC2635 |
用途 | |
英文名称 | Pectinase activity assay kit |
包装规格 | |
纯度 | % |
CAS编号 | |
保质期 | 1年 |
是否进口 |
产品内容:
提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。
试剂一:液体 25mL×1 瓶,4℃保存。若溶液中有不溶解物质,可以 50℃水浴溶解。
试剂二:液体 20mL×1 瓶,4℃避光保存。
标准品:粉剂×1 支,10mg 半乳糖醛酸。临用前加入 0.943mL 蒸馏水,配成 50μmol/mL 的标准液
产品说明:
果胶酶(pectinase)是分解果胶的酶类,包括原果胶酶,果胶酯酶,多聚半乳糖醛酸酶和果胶裂解酶四大类,广泛存在于高等植物果实和微生物中,是水果加工中最重要的酶。
果胶酶水解果胶生成半乳糖醛酸,半乳糖醛酸与 DNS 试剂反应生成在 540nm 有特征吸收峰的棕红色物质,测定 540nm 处吸光值变化可计算得果胶酶活性。
试验中所需的仪器和试剂:
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入
1mL 提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
菌类:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加
入 1mL 提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 10000g,
4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
液体:直接检测。
二、测定步骤:
1、分光光度计/酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 540nm,蒸馏水调零。
2、将 50μmol/mL 标准液用蒸馏水稀释为 10、8、6、4、2、1μmol/mL 的标准溶液备用。
3、取 40μL 样本沸水浴 10min 备用。
4、操作表:(在 1.5mL 离心管中)
对照管 测定管 标准管 空白管
试剂一(μL) 200 200 200 200
50℃水浴温育 5min
标准溶液(μL)- - 40 -
样本(μL) - 40 - -
蒸馏水(μL) - - - 40
煮沸样本(μL) 40 - - -
混匀,50℃水浴反应 30min,马上沸水浴 5min,冷却后 8000g,常温离心 10min,取上清。
上清液(μL) 150 150 150 150
试剂二(μL) 150 150 150 150
沸水浴 5min,冰浴冷却终止反应,吸取 200μL 于微量玻璃比色皿或 96 孔板中测定 540nm 处吸光值 A,计算△A=A 测定管-A 对照管,△A 标准=A 标准管-A 空白管。每个测定管需设一个对照管。
注意事项:
1、 A 大于 1.5 时,建议将样品稀释后再进行测定。
2、 植物果实组织建议将样本稀释 10 倍或 20 倍后再测定。
相关文献:
《Transcription factor VmSeb1 is required for the growth, development, and virulence in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu,Liangsheng Xu,Zhiyuan Yin,Hao Feng,Lili Huang 期刊:Microbial Pathogenesis 影响因子:2.332 PMID:29959044
《Two members of the velvet family, VmVeA and VmVelB, affect conidiation, virulence and pectinase expression in Valsa mali》 作者:Yuxing Wu , Liangsheng Xu , Zhiyuan Yin , Qingqing Dai , Xiaoning Gao, Hao Feng , Ralf T. Voegele , Lili Huang 期刊:Molecular Plant Pathology 影响因子:4.379 PMID:29127722