共价结合型果胶（CSP）含量检测试剂盒说明书
微量法
注意：正式测定之前选择2-3 个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Covalently bound pectin (CSP) content detection kit
关键词：共价结合型果胶|共价结合型果胶含量|CSP|CSP含量检测
货号：BC4135
规格：100T/48S
产品内容：
提取液一：80%乙醇，自备。即将80mL 无水乙醇和20mL 蒸馏水混合。
提取液二：液体50mL× 1 瓶，4℃保存。
提取液三：液体70mL× 1 瓶，4℃保存。
试剂一：浓硫酸30mL，自备。
试剂二：液体3mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体5mL× 1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，10mg 半乳糖醛酸，4℃保存。临用前加入0.943mL 提取液三，配成50μmol/mL的标准液
产品说明：
果胶(Pectin)是构成细胞初生壁和中胶层的主要成分，对细胞起着软化和黏合作用。果胶间以Ca2+桥及其他离子键、氢键、糖苷键、酯键和苯环偶联的方式交联，通过不同的抽提方法可以提取各种形式的果胶，如水溶性果胶（WSP）、离子结合型果胶（ISP）和共价结合果胶（CSP）。
利用带有螯合剂的碱溶液提取共价结合型果胶（CSP），其在酸性条件下水解生成半乳糖醛酸，后者在硫酸溶液中与咔zuo进行缩合反应形成紫红色的化合物，生成物质在530 nm 处有*吸收峰。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、丙tong、浓硫酸、无水乙醇和蒸馏水。
操作步骤：
一、共价结合型果胶的提取：
取约0.1g 样本，加入1mL 提取液一，室温快速匀浆，95℃水浴20min，冷却至室温，4000g 25℃离心10min，弃上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙tong交替各洗2 遍（涡旋振荡2min 左右，4000g25℃离心10min，弃上清即可），沉淀即为粗细胞壁，加入1mL 提取液二（去除淀粉）浸泡15 小时，4000g 25℃离心10min，弃上清，加入1mL 提取液三，充分匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清液待测。
二、测定步骤：
1、分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至530nm，蒸馏水调零。
2、将50μmol/mL 标准液用提取液三稀释为0.8、0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05μmol/mL 的标准溶液备用。
3、操作表：

三、共价结合型果胶含量的计算：
1、标准曲线的绘制：
以各个标准溶液的浓度为x 轴，其对应的△A 标准为y 轴，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b，将△A 测定带入方程得到x（μmol/mL）
2、共价结合型果胶含量的计算：
共价结合型果胶含量(μmol /g 鲜重)= x×V 提取液三÷W =x÷W
V 提取液三：加入提取液三的体积，1mL；
W：样本鲜重，g。
注意事项：
1、浓硫酸具有强腐蚀性，操作时需特别注意，90℃加热取出后冷却再打开盖子，以防液体飞溅烧伤。
2、若△A 超过0.3，可将样本提取液三进行适当稀释再进行测定，并在计算公式中乘以稀释倍数。