亮氨酸氨基肽酶（LAP）活性检测试剂盒说明书
可见分光光度法
注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。
英文名称：Leucine aminopeptidase (LAP) activity assay kit
关键词：亮氨酸氨基肽酶|亮氨酸氨基肽酶活性检测|LAP|LAP活性检测
货号：BC4140
规格：50T/48S
产品内容：
试剂一：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，4℃避光保存；临用前加入5mL丙tong溶解。
产品说明：
LAP是一种膜结合酶，广泛存在于肝、胆、胰等组织中，参与组织蛋白和某些肽类的降解更新。
各类肝病患者因肝细胞损伤，血清LAP的活性均有不同程度的升高，LAP可以作为各类肝病的一项初步检测指标，特别是肝癌鉴别诊断的指标。
LAP分解L-亮氨酸对硝基ben胺生成对硝基ben胺，后者在405nm有*吸收峰，通过测定吸光值升高速率来计算LAP活性。
自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL玻璃比色皿、丙tong、匀浆器/研钵。
操作步骤：
一、样本处理：
组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 试剂一）进行冰浴匀浆，然后，10000g，4℃，离心10min。
细胞：按照细胞数量（104 个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细胞加入1mL 试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3 秒，间隔7 秒，总时间3min）；然后10000g，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。液体：直接检测。
二、测定操作：
1、分光光度计预热30min以上，波长调至405nm，蒸馏水调零。
2、加样表：在1mL玻璃比色皿中分别加入下列试剂

三、酶活计算公式
1、血清（浆）LAP 活力的计算：
单位的定义：每mL血清（浆）每分钟生成1nmol的对硝基ben胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/mL）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷V样÷T=675.4×ΔA
2、组织、细菌或细胞中LAP 活力的计算:
（1） 按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟生成1nmol对硝基ben胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U/mg prot）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(V样×Cpr) ÷T=675.4×ΔA÷Cpr
（2） 按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟生成1nmol对硝基ben胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U /g 鲜重）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(W× V样÷V样总) ÷T=675.4×ΔA÷W
（3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟生成1 nmol对硝基ben胺定义为一个酶活力单位。
LAP（U /104 cell）＝[ΔA×V反总÷（ε×d）×109 ]÷(500×V样÷V样总) ÷T=1.35×ΔA
V 反总：反应体系总体积，1×10-3 L；
ε：对硝基ben胺摩尔消光系数，9.87×103 L / mol /cm；
109：1mol=109nmol ；
d： 比色皿光径，1cm；
V 样：加入样本体积，0.05 mL；
V 样总：加入试剂一体积，1 mL；
T：反应时间，3 min；
Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL，需单独测定；
W：样本质量，g；
500：细菌或细胞总数，500万。
注意事项：
1、△A大于0.5时或者A值大于1.5时建议将样品上清用试剂一稀释后再进行测定。
2、空白管的△A变化小于0.01。