β-木糖苷酶（β-xylosidase）测定试剂盒说明书
分光光度法
英文名称：Β-xylosidase activity assay kit
关键词:β-木糖苷酶|β-木糖苷酶活性检测|β-木糖苷酶活性|木糖苷酶
货号：BC2620
规格：50 管/24 样

产品内容： 
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 35mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 35mL×1 瓶，4℃保存。
标准液：液体1ml×1支，4℃保存，10mmol/ml对硝基ben酚溶液。

产品说明：
 β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关 键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造 纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。 β-木糖苷酶催化对硝基ben酚-β-D-木糖苷产生对硝基ben酚，对硝基ben酚在 405nm 处有特征吸收峰， 测定 405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL 玻璃比色皿和蒸馏水。

操作步骤：

• 粗酶液提取 1. 植物样本：称取约 0.1g 样品，加 1.0mL 提取液充分冰浴匀浆，然后 12000rpm， 4℃，离心 20min， 弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。 2. 细菌、真菌样本：收集约 500 万个细胞，加入 1.0mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率 300w， 超声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min） ；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，弃沉淀 ，取 20μL 上 清测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。 3. 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0 mmol/ml。

• 测定操作表

对照管    测定管     标准管
酶液（μL）或标准液    200       200        200
试剂一（μL）                    50     
试剂二（μL）          400       350         400  
混匀，45℃水浴 20min  
试剂三（μL）          400       400         400
混匀，静置 5min， 1mL 玻璃比色皿，蒸馏水调零，测定 A405。△A=A 测-A 对照

β-木糖苷酶活性计算公式
根据标准管的吸光度（x）和浓度（y，mmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算 样品生成的产物量（mmol/ml）。

1. 按蛋白含量计算

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1μmol 对硝基ben酚的酶量为一个酶活单 位。 β-木糖苷酶活性（mmol/min/mgprot）=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr

2. 按样本质量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品 1min 内催化产生 1μmol 对硝基ben酚的酶量为一个酶活单位。 β-木糖苷酶活性（mmol/min/g）＝(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=0.25×y÷W

3. 按细胞数量计算：

酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 104个细胞 1min 内催化产生 1μmol 对硝基ben酚的酶量为一个酶活单 位。 β-木糖苷酶活性（mmol/min/104cell）=(y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.0005×y

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
V 反总：反应体系总体积，1mL；
V 样：加入反应体系中样 本体积，0.2mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500 万；
T：反应时间，20min。

注意事项： 

1. 吸光度变化应该控制在 0.05-0.6 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算 的稀释倍数要相应改变。

2、 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定。