β-木糖苷酶（β- xylosidase）测定试剂盒说明书
微量法
英文名称：Β-xylosidase activity assay kit
关键词:β-木糖苷酶|β-木糖苷酶活性检测|木糖苷酶
货号：BC2625
规格：100T/48S

产品内容：
提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体 1mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
标准液：液体1ml×1支，4℃保存，10μmol/ml对硝基ben酚溶液。

产品说明：
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、细菌和真菌等生物体，是催化木聚糖类半纤维素降解的关键酶，产物木糖可作为碳源应用于微生物发酵。另外，β-木糖苷酶还可以作为生物漂白剂应用于造纸工业，比传统的漂白法环保，具有广泛的应用价值。

β-木糖苷酶催化对硝基ben酚-β-D-木糖苷产生对硝基ben酚，对硝基ben酚在 405nm 处有特征吸收峰，测定 405nm 光吸收增加速率，可计算β-木糖苷酶活性。

自备实验用品及仪器：
天平、低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96 孔板和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：
1. 植物样本：称取约 0.1g 样品，加 1mL 提取液充分冰浴匀浆，然后 12000rpm，4℃，离心 20min，
弃沉淀 ，取 20μL 上清测定蛋白含量，剩余上清作为待测酶液。
2. 细菌、真菌样本：收集约 500 万个细胞，加入 1mL 提取液，超声波破碎（冰浴，功率 300w，超
声 3 秒，间隔 7 秒，总时间 3min）；然后 10000rpm，4℃，离心 10min，弃沉淀 ，取 20μL 上清
测定蛋白含量，剩余上清置于冰上待测。
3. 标准液的处理：用试剂二将标准液稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0μmol/ml。
二、测定操作表：
1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 405nm，对照管调零。
2、操作表
对照管 测定管 标准管
酶液（μL）      40    40     40
试剂一（μL）          10
试剂二（μL）    80    70     80
混匀，45℃水浴 20min
试剂三（μL）    80    80     80
混匀，静置 5min，对照管调零， 微量石英比色皿/96 孔板，测定 405nm 吸光值，记为 A405。

β-木糖苷酶活性计算公式：
根据标准管的吸光度（x）和浓度（y，μmol/ml）建立标准曲线，将△A带入标准曲线中，计算样品生成的产物量（μmol/ml）。
1、按蛋白含量计算
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每毫克蛋白质 1min 内催化产生 1 mol 对硝基ben酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min / mg prot）=(y×V 反总)÷(V 样×Cpr)÷T=0.25×y÷Cpr
2、按样本质量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每克样品 1min 内催化产生 1 mol 对硝基ben酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min /g）＝(y×V 反总)÷(W×V 样÷V 样总)÷T=0.25×y ÷W
3. 按细胞数量计算：
酶活定义：45℃，pH7.4 时，每 10
4个细胞 1min 内催化产生 1 mol 对硝基ben酚的酶量为一个酶活单位。
β-木糖苷酶活性（μmol/min /104cell）= (y×V 反总)÷(500×V 样÷V 样总)÷T=0.0005×y

Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；
V 反总：反应体系总体积，0.2mL；
V 样：加入反应体系中
样本体积，0.04mL；
V 样总：加入提取液体积，1mL；
W：样本质量，g；
500：细胞或细菌总数，500 万；
T：反应时间，20min。

注意事项：
1、 吸光度变化应该控制在 0.05~0.6 之间。否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2、 样品蛋白质含量需要另外测定，可选用考马斯亮蓝法蛋白含量测定试剂盒进行测定