测定意义：

LDH（EC 1.1.1.27）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是糖酵解途径的末端酶，催化丙酮酸与乳酸之间的可逆反应，伴随着NAD+/NADH之间互变。
测定原理：

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸，丙酮酸进一步与2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中显棕红色，颜色深浅与丙酮酸浓度成正比。
试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。

操作步骤： 

一、样品测定的准备：

 1. 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积 （mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴， 功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次） ，8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 

2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液）， 进行冰浴匀浆；8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 3. 血清（浆）样品：直接检测。

 二、测定操作：

 1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 450nm，蒸馏水调零。

 2. 样本测定（在 EP 管中加入下列试剂） 

                    试剂名称(μL)                       测定管                          对照管 

                     样本                                     50                                 50                                                                            试剂一                                 250                               250                                                                          试剂二                                 50                                                                                                                蒸馏水                                                                       50                                                                         充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min
                    试剂三                                  250                               250                                                                         充分混匀，37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 15min                                                             试剂四                                  750                               750                                                            充分混匀，室温静置 3min，450nm 下测定吸光度，计算ΔA=A 测定管-A 对照管。每个测定管需要设一个对 照管。 

LDH活力单位计算： 

1. 标准条件下测定的回归曲线， y=0.725x (x 为标准品浓度，μmol/mL；y 为对吸光度)。                    2. 血清（浆）LDH 活力的计算                                                                                                                               单位的定义：每 mL 血清（浆）每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。                       LDH（U/mL）=ΔA÷0.725÷T×103=92×ΔA                                                                                3. 细胞、细菌和组织中 LDH 活力的计算                                                                                                         （1） 按样本蛋白浓度计算：                                                                                                                             单位的定义：每 mg 组织蛋白每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。                           LDH（U/mgprot）=[ΔA÷0.725×V1]÷(V1×Cpr)÷T×103 =92×ΔA÷Cpr 需要另外测定，建议使用本公司 BCA 蛋白质含量测定试剂盒。                                                                                                     （2） 按样本鲜重计算：                                                                                                                                   单位的定义：每 g 组织每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。                                     LDH（U/g 鲜重）=[ΔA÷0.725×V1]÷(W×V1÷V2)÷T×103 =92×ΔA÷W                                           （3） 按细菌或细胞密度计算：                                                                                                                         单位的定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟催化产生 1nmol 丙酮酸定义为一个酶活力单位。                   LDH（U/104 cell）=[ΔA÷0.725×V1]÷(500×V1÷V2)÷T×103 =0.184×ΔA÷W                                           V1：加入反应体系中样本的体积，0.05mL；V2：加入提取液的体积，1mL； T：反应时   间，15min；Cpr： 蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g;500：细胞或细菌总数，500 万。

相关文献：

《Effects of Quercetin on Proliferation and H2O2-Induced Apoptosis of Intestinal Porcine Enterocyte Cells》 作者:Zhigang Chen , Qiaoling Yuan , Guangren Xu , Huiyu Chen , Hongyu Lei  and Jianming Su 期刊:Molecules 影响因子:3.06 PMID:
《Enhancing the electricity generation and sludge reduction of sludge microbial fuel cell with graphene oxide and reduced graphene oxide》 作者:Hanmin Zhang,Zongyang Da,Yujie Feng,Yuezhu Wang,Lu Cai,Hongtao,Cui 期刊:Journal of Cleaner Production 影响因子:6.395 PMID:
《Involvement of the two l-lactate dehydrogenase in development and pathogenicity in Fusarium graminearum》 作者:Wenchan ChenLingling WeiYu ZhangDongya ShiWeichao RenZhihui ZhangJin WangWenyong ShaoXiali LiuChangjun ChenEmail authorQingli Gao 期刊:Curr Genet 影响因子:3.464 PMID:30474697
《Caspase 3 may participate in the anti-tumor immunity of dendritic cells》 作者:JinqiangLiuab1FeiWangac1DandanYind1HongweiZhangaFanFeng 期刊:Biochemical and Biophysical Research Communications 影响因子:2.705 PMID:30797554
《Curcumin attenuates hypoxia/reoxygenation?induced cardiomyocyte injury by downregulating Notch signaling》 作者:Peng Zhu Manli Yang Hao He Zhibin Kuang Mu Liang Anxiao Lin Song Liang Qiyun Wen Zhiqin Cheng Chaofeng Sun 期刊:Mol Med Rep 影响因子:1.851 PMID:31257466
《Alginate/chondroitin sulfate based hybrid hydrogel with different molecular weight and its capacity to regulate chondrocytes activity.》 作者:Ma Fenbo,Pang Xiangchao,Tang Bin 期刊:Carbohydr Polym 影响因子:6.044 PMID:30553317
《Upregulation of miRNA‐223‐3p ameliorates RIP3‐mediated necroptosis and inflammatory responses via targeting RIP3 after spinal cord injury》 作者:Yang Wang,  Jianhang Jiao,  Pengfei Ren,  Minfei Wu 期刊:Journal of cellular physiology  影响因子:4.522 PMID:30821011

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