产品内容：

 提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体9mL×1 瓶， 4℃保存； 试剂二：液体50mL×1 瓶， 4℃保存； 丙酮酸钠标准液，1mg/mL：液体1mL×1瓶， 4℃保存。

产品说明：

 丙酮酸通过乙酰CoA 连接葡萄糖、脂肪酸和氨基酸三大代谢，起着重要的枢纽作用。 丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，在碱性溶液中呈樱红色。

需自备的仪器和用品：

 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰、蒸馏水。

操作步骤： 

一、丙酮酸提取： 1、 细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）： 提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液），超声波 破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次），静置30min，8000g，常温离 心10min，取上清待测。 2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待测。 3、 血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议取0.1mL 血清（浆）加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆，静置30min，8000g，常温离心10min，取上清待 测。 4、 标准品的准备：将标准品用蒸馏水稀释至100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0?g/ml。 

二、测定步骤： 1、 分光光度计预热30min 以上，调节波长至520nm，蒸馏水调零。 2、 取300μL标准品或样本+100μL 试剂一于1.5mLEP 管中，混匀，静置2min，加入500μL 试剂二， 混匀，于520nm 波长处测定吸光值A。 

三、丙酮酸含量计算： 

1、 根据标准品浓度和测定值建立标准曲线；y为丙酮酸钠含量（μg/mL），x为吸光值。

 2、 按照血清（浆）体积计算 

       丙酮酸含量（μg/mL）=(y×V1)÷（V3×V1÷V2）=y×103、

 3、按照蛋白浓度计算 

      丙酮酸含量（μg/mgprot）=(y×V1)÷(V1×Cpr)=y÷Cpr 

4、 按照样品质量计算 

       丙酮酸含量（μg/g 鲜重）=(y×V1)÷(W×V1÷V2）=y÷W

 5、 按照细菌或细胞密度计算 

        丙酮酸含量（μg/104 cell）＝(y×V1)÷（500×V1÷V2）=y÷500 

V1：加入反应体系中样本体积，0.3mL；V2：加入提取液体积，1mL；V3：加入血清（浆）体 积，0.1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

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