产品内容： 

提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂一：液体 60mL×1 瓶，4℃保存； 试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存。

产品说明： 

GDH（EC 1.4.1.2）广泛分布于植物中，和谷氨酸合成酶（GOGAT）共同参与谷氨酸的合成， 在氨同化和转化成有机氮化合物的代谢中起重要作用。 GDH 催化 NH4+、α-酮戊二酸和 NADH，生成谷氨酸和 NAD+，引起 340nm 吸光度下降。通过 测定 340nm 吸光度的下降速率，计算 GDH 活性。
试验所需自备的仪器和用品： 紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤： 

一、粗酶液提取： 1、收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，超声 波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次）；8000g 4℃离心 10 分钟， 取上清，置冰上待测。 2、称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10 分钟，取上清，置冰上待 测。

 二、测定步骤： 1、紫外分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。 2、样本测定 （1）工作液的配制：临用前将试剂一加入试剂二中混合溶解，置于 37℃（哺乳动物）或 25℃（其 它物种）水浴 5min； （2）取 1mL 工作液和 0.05mL 样本于光径为 1cm 的 1mL 石英比色皿中，混匀，加样本的同时开始 计时，在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1 和 5 分 20 秒时的吸光度 A2，计算?A=A1-A2。

三、GDH 活性计算： （1）按样本蛋白浓度计算： 单位的定义： mg 组织蛋白分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GDH（U/mg prot）＝[?A×V 反总÷（ε×d）×109]÷(Cpr×V 样) ÷T=675×?A÷Cpr（2）按样本鲜重计算： 单位的定义： g 组织分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GDH（U/g 鲜重）＝[?A×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样÷V 样总×W)÷T=675×?A÷W （3）按细菌或细胞密度计算： 单位的定义： 1 万个细菌或细胞分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 GDH（U/104 cell）＝[?A×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样÷V 样总×500)÷T=1.35×?A V 反总：反应体系总体积，1.05×10-3 L；ε：NADH 摩尔消光系数，6.22×103 L / mol /cm；d：比 色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反应时间， 5 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质，g；500：细菌或细胞总数，500 万。

注意事项： 1、当?A 大于 0.5 时，将样本进行稀释后测。 2、由于提取液中含有一定浓度的蛋白（约 1mg/mL），所以在测定样品蛋白浓度时需要去提取液 本身的蛋白含。

相关文献：

《Knockout of SlSBPASE Suppresses Carbon Assimilation and Alters Nitrogen Metabolism in Tomato Plants》 作者:Fei Ding, Qiannan Hu, Meiling Wang and Shuoxin Zhang 期刊:International Journal of Molecular Sciences 影响因子:4.183 PMID:30558146

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