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| 产地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 货号 | BC0430 |
| 保存条件 | 2-8℃保存 |
| 英文名称 | ADPG pyrophosphorylase (AGP) test kit |
| CAS编号 | |
| 保质期 | 1年 |
产品规格：50管/48样 产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存； 参考价格：2200
库存状态：现货
关键字: ADPG焦磷酸化酶检测试剂盒|AGP检测试剂盒|ADPG焦磷酸化酶|试剂盒
简要介绍：
AGP催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
产品详细描述
产品内容：
提取液：液体25mL×1瓶，4℃保存;
试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每支加入4mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂四：粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入500μL双蒸水充分溶解备用；用不完的试剂-20℃保存；
试剂五：液体250μL×1支，-20℃保存。
产品说明：
AGP (EC 2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸（G1P）与ATP反应生成淀粉合成的直接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。
AGP催化的逆向反应生成G1P，在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。
需自备的仪器和用品：
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水
操作步骤：
一、粗酶液制备
称取约0.1g组织加入1mL提取液，冰浴中匀浆。10000g ，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
在EP管中按顺序加入下列试剂（如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二按比例配成混合液1，将试剂一、三、四和五按比例配成混合液2）
| 试剂名称（μL） | 测定管 |
| 试剂一 | 100 |
| 试剂二 | 160 |
| 样本 | 20 |
混匀，30℃保温15 min，置沸水浴中1 min（盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却。试剂一、试剂三置37℃保温10min以上。
| 试剂一 | 300 |
| 试剂三 | 100 |
| 试剂四 | 20 |
| 试剂五 | 10 |
混匀后立即在340nm波长下记录初始吸光度A1和 2min后的吸光度A2，计算ΔA=A2-A1。
三、AGP活性计算
1、按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活性单位。
AGP活性（U/mg prot）＝ΔA÷ε÷d×V反总÷T÷（Cpr×V样本）=2854×ΔA÷Cpr。
此法需要自行测定粗酶液蛋白质浓度。
2、按照样本鲜重计算
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟催化产生1nmol NADPH定义为一个酶活力单位。
AGP活性（U/g 鲜重）＝ΔA÷ε÷d×V反总÷T÷（W×V样本÷V提取）=2854×ΔA÷W。
T：反应时间，2min；ε：NADPH消光系数，6.22×10-3mL˙nmol-1˙cm-1；V反总：反应总体积，0.71mL；d:石英比色皿光程，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V样本：加入的样本体积，0.02mL；V提取：加入的提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g。
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