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产地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
货号 | BC0710 |
用途 | |
英文名称 | Α-ketoglutarate dehydrogenase (α-KGDH) detection kit |
包装规格 | |
纯度 | % |
CAS编号 | |
保质期 | 1年 |
是否进口 |
产品规格:50管/48样 产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:1300
库存状态:现货
关键字:: α酮戊二酸脱氢酶检测试剂盒|α-KGDH检测试剂盒|α酮戊二酸脱氢酶|试剂盒
简要介绍:
α-KGDH(EC1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和NADH,NADH在340nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
产品详细描述
产品内容:
试剂一:液体60mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:液体0.6mL×1支,-20℃保存;
试剂三:液体55mL×1瓶,4℃保存;
试剂四:粉剂×1支,4℃保存;
试剂五:粉剂×1支,4℃保存;
试剂六:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂七:粉剂×1支,-20℃保存;
试剂八:粉剂×1支,-20℃避光保存。临用前加入2mL双蒸水充分混匀待用,用不完的试剂仍-20℃保存。
工作液的配制:临用前把试剂四、试剂五、试剂六、试剂七转移到试剂三中混合溶解待用。
产品说明:
α-KGDH(EC 1.2.4.2)广泛存在于动物、植物微生物和培养细胞的线粒体中,是三羧酸循环调控关键酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成琥珀酰辅酶A。
α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和辅酶A生成琥珀酰辅酶A、二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。
试验所需自备仪器和样品:
紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1mL石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、α-KGDH的提取
称取约0.1g组织或收集约500万细胞,加入1mL试剂一和10uL试剂二,冰浴用匀浆器或研钵充分研磨,4 ℃ 11000 g离心10min,取上清,置冰上待测。
二、测定步骤
1. 分光光度计预热30min以上,调节波长到340 nm,蒸馏水调零
2. 空白管:
取1mL工作液加入1mL石英比色皿,37℃孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL蒸馏水,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A1,37℃准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A2,计算ΔA空白=A2-A1。
3.测定管:
取1mL工作液加入1mL石英比色皿,在37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)孵育5min后取出比色皿,再依次加入40μL试剂八和60μL样本,混匀并立即测量340nm处0s的吸光值A3,37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)中准确反应2min,记录340nm处2min时的吸光值A4,计算ΔA测定=A4-A3。
相关文献:
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