产品名称:：γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测试剂盒

产品英文名：

产品货号：BC1220       产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格：50管/48样          产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：260
库存状态：现货                          
关键字：：γ-谷氨酰转肽酶试剂盒|活性检测试剂盒|γ-GT含量检测|试剂盒|

简要介绍：
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。 
    γ-GT催化谷氨酰对硝基ben胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。  

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体12.5mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体44.5mL×1瓶，4℃保存。
工作液（在试剂一瓶中配制）：临用前配制，把试剂二倒入试剂一瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂三倒入试剂一瓶中，混匀后室温保存。
标准液：液体5mL×1瓶，4℃保存。5mmol/L对硝基ben胺标准液。若不溶解，放于沸水浴中溶解。
产品说明：
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰对硝基ben胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（10⁴个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约0.1g样品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm离心15min，取上清液待测。
血清（浆）：直接检测。
二、测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上（保证无沉淀）。

3. 标准管的测定：将标准管成倍稀释为0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.009765、0.0049 、0 mmol/L浓度的对硝基ben胺标准溶液，取0.1mL标准液，加入0.9mL工作液混匀后分别测定其在405nm下的吸光度A标准，记A标准，浓度0记为A空白。计算ΔA标准=A标准-A空白。

4. 样品测定：

混匀后于405nm测定10s时的吸光度，吹打混匀后测量130s时的吸光度，记为A1和A2。计算ΔA测定=A2-A1。计算ΔA测定=ΔA -ΔA空白管。
三、γ-GT活性计算：

1. 标准曲线的绘制：

以对硝基ben胺浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，计算标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得x（mmol/L）。

2. γ-GT活性计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：
活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1mmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/mg prot）=x×V样÷（Cpr×V样）÷T=0.5×x÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算：
活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每克组织每分钟催化产生1mmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/g 鲜重）=x×V样÷（W÷V提取×V样）÷T=0.5×x÷W。
（3）按血清（浆）计算：
活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每升血清每分钟催化产生1mmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/L 血清（浆））=x÷T=0.5×x。
（4）按细菌或培养细胞计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1mmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/10⁴ cell）=x×V样÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.001×x。
V样：加入样品体积，0.1 mL；V提取：加入提取液体积：1mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500:500万细胞。
注意事项：
培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。