产品名称:：γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)活性检测试剂盒 微量法

产品英文名：

产品货号：BC1225             产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格：100管/96样            产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：480
库存状态：现货                          
关键字：：γ-谷氨酰转肽酶试剂盒|活性检测试剂盒|γ-GT含量检测|试剂盒|微量法

简要介绍：
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。 
    γ-GT催化谷氨酰对硝基ben胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。  

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：粉剂×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体4.9mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：液体18.4mL×1瓶，4℃保存。
工作液（在试剂一瓶中配制）：临用前配制，把试剂二倒入试剂一瓶中，充分溶解（室温过低时可以40℃水浴促进溶解）；然后把试剂三倒入试剂一瓶中，混匀后室温保存。
标准液：液体1mL×1支，4℃保存。5mmol/L对硝基ben胺标准液。
产品说明：
γ-GT是γ-谷氨酰循环中的关键酶，催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨酰基化合物上的γ-谷氨酰基转移到受体。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解，产生谷氨酸盐，在细胞外谷胱甘肽新陈代谢中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰对硝基ben胺中γ-谷氨酰基转移给N-甘氨酰甘氨酸，生成对硝基ben胺，在405nm有特征光吸收；通过测定405nm光吸收增加速率，来计算γ-GT酶活性。
试验中所需的仪器和试剂：
可见分光光度计/酶标仪、低温离心机、水浴锅、可调式移液器、微量玻璃比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：   
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；10000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：称取约0.1g样品，加提取液1.0 mL充分研磨，于4℃，10000rpm离心15min，取上清液待测。
血清（浆）：直接检测。  
二、测定步骤：

1. 分光光度计/酶标仪预热30min以上，调节波长至405nm，蒸馏水调零。

2. 工作液置于25℃（一般物种）或者37℃（哺乳动物）水浴中预热30min以上（保证无沉淀）。

3. 标准管的测定：将标准管稀释为1.25、0.625、0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.002、0 mmol/L浓度的对硝基ben胺标准溶液，取0.02ml标准液，加入0.18ml工作液混匀后分别测定其在405nm下的吸光度，记A标准，浓度0记为A空白。计算ΔA标准=A标准-A空白。

4. 样品测定：

混匀后于405nm测定10 s时的吸光度，吹打混匀后测量130s时的吸光度，记为A1和A2。计算ΔA =A2-A1。计算ΔA测定=ΔA测定-ΔA空白管。
三、γ-GT活性计算：

1. 标准曲线的绘制：

以对硝基ben胺浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，计算标准方程y=kx+b，将ΔA测定带入方程得x（mmol/L）。
2、γ-GT活性计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每毫克蛋白每分钟催化产生1μmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/mg prot）=x×V样÷（Cpr×V样）÷T=0.5×x÷Cpr。
（2）按样本鲜重计算：
活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每克组织每分钟催化产生1μmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/mg 鲜重）=x×V样÷（W÷V提取×V样）÷T=0.5×x÷W。
（3）按血清（浆）计算：
活性单位（U）定义：25℃或者37℃中，每毫升血清每分钟催化产生1μmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/mL 血清（浆））=x×V样÷V血清（浆）÷T=0.5×x。
（4）按细菌或培养细胞计算：
    单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1μmol对硝基ben胺为一个活性单位。
γ-GT（U/10⁴ cell）=x×V样÷(500×V样÷V提取) ÷T=0.001×x。
V样：加入样品体积，0.02 mL；V提取：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，2 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/ml；W：样本质量，g；V血清（浆）：加入血清（浆）体积，0.02 mL；500：500万细胞。
注意事项：
培养细胞中γ-GT活性测定时，细胞中γ-GT的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理，不能用细胞裂解液处理细胞（防止因为蛋白质变性导致酶失活）。