产品详细描述
产品内容：
试剂一：液体120mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体6mL×1瓶，室温保存。
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
标准品：59.3μL×1支，4℃保存。临用前加入1.5 mL无水乙醇配成125 μmol/mL的油酸标准溶液，充分溶解。用前注意解冻溶解。
产品说明：
LPS又称甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和单酯）。LPS广泛的存在于各种生物中。血清中LPS的异常增高常见于*炎和*癌。
LPS催化油酯水解成脂肪酸，利用铜皂法测定脂肪酸生成速率，即可计算LPS活性。

自备仪器和用品：
   研钵、台式离心机、震荡混匀器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/酶标板（非聚苯乙烯材质）、可调式移液枪、甲苯、无水乙醇、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：   
组织样品：称取约0.1g样品，加试剂一1.0 mL充分研磨，于4℃，15000rpm离心30min，取上清液待测。
血清样品：直接检测。
二、测定步骤：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长至710nm，甲苯调零。

2. 试剂一和试剂二置于37℃水浴预热30min以上。

3. 标准溶液的稀释：将125 μmol/mL的油酸标准溶液稀释为125、62.5、31.25、15.625、7.8125、3.9 μmol/mL的标准溶液待测。

4. 操作表：

取出离心管，小心吸取上层溶液0.3 mL，加入另一2 mL塑料离心管中，按下表操作

反复震荡混匀；室温4000rpm离心10 min，小心吸取上层溶液800 μL，加入1mL玻璃比色皿，于710nm处测定吸光值。记为A空白管，A测定管，A标准管，计算ΔA测定= A测定管-A空白管，ΔA标准= A标准管-A空白管。

三、LPS活性计算：

1. 标准曲线的绘制：以油酸标准溶液浓度为横坐标，ΔA标准为纵坐标，绘制标准曲线，得到标准方程y=kx+b。将ΔA测定带入方程，得到x（μmol/mL）

2. 酶活计算：

（1）按蛋白浓度计算：
活性单位定义：37℃中每毫克蛋白每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mg prot) =x×V样÷（Cpr×V样) ÷T= 0.1×x÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
活性单位定义：37℃中每克组织每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/g 鲜重) =x×V样÷（W×V样÷V提) ÷T= 0.1×x÷W
（3）按血清计算：
活性单位定义：37℃中每毫升血清每分钟水解橄榄油生成1μmol脂肪酸为一个酶活单位。
LPS (U/mL 血清) =x÷T= 0.1×x。
V样：加入反应体系中上清液体积，0.2 mL；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL，需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量测定试剂盒；T：催化反应时间，10 min。W：样本鲜重，g；V提：提取液体积，1mL。
注意事项：
1、甲苯有毒，实验过程中需佩戴手套和口罩。
2、实验过程中须远离火源。
3、当吸光度大于1时，建议将样本稀释后测量。

相关文献：

《Sadenosyl methionine regulates calcium channels and inhibits uterine smooth muscle contraction in rats with infectious premature delivery through the transient receptor protein 3/protein kinase Cβ/C?kinase?activated protein phosphatase?1 inhibitor of 17 kDa signaling pathway》 作者:Jing Ge, Tao Han, Xiaoqiu Li, Lili Shan, Jinhuan Zhang, Yan Hong, Yanqiu Xia, Jun Wang, Mingxiao Hou 期刊:Experimental and Therapeutic Medicine 影响因子:1.41 PMID:29896230