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NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH活性检测试剂盒 紫外分光光度法
NADP-苹果酸脱氢酶（NADP-MDH活性检测试剂盒 紫外分光光度法
品牌：
Solarbio
产地：
北京
货号：
BC1050
发布日期：
2019-05-20
更新日期：
2025-11-06
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产品详请
产地
北京
品牌
Solarbio
货号
BC1050
保存条件
2-8℃保存
英文名称
NADP-malate dehydrogenase (NADP-MDH activity assay kit)
CAS编号
保质期
1年
产品名称：
NADP-苹果酸脱氢酶(NADP-MDH)活性检测试剂盒
产品英文名：
NADP-Malate Dehydrogenase（NAD-MDH）Assay Kit
产品货号：
BC
1050
产地：北京市通州区马驹桥联东
U谷85A三楼
产品规格：
50管/48样
产品商标：
solarbio
保存与运输：
4
℃
保存或
-20
℃
保存；
参考价格：
400
库存状态：现货
关键字：
NADP-苹果酸脱氢酶试剂盒
|
苹果酸脱氢酶活性检测
|
NADP-MDH活性检测|试剂盒
简要介绍：
MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草 酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着 重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不 同的辅酶特异性，MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH， NADP-MDH 主要存在于 真核细胞中。 NADP-MDH 催化 NADPH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。
产品详细描述
商品货号：
商品品牌：
规格
基本售价：
选择规格
BC1050-50管/48样
Solarbio
50管/48样
400.00元
产品内容
提取液：提取液
50 mL×1 瓶，在 4℃保存；
试剂一：液体
40 mL×1 瓶，在 4℃保存；
试剂二：粉剂
×2 支，-20℃保存；临用前加入 250μL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存； 试剂三：粉剂×2 支，-20℃保存；临用前加入 300μL 双蒸水，用不完的试剂仍-20℃保存。
产品说明
MDH （EC 1.1.1.37）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，线粒体中 MDH 是 TCA 循环的关键酶之一，催化苹果酸形成草酰乙酸；相反，胞浆中 MDH 催化草酰乙酸形成苹果酸。草 酰乙酸是重要的中间产物，连接多条重要的代谢途径。因此，MDH 在细胞多种生理活动中扮演着 重要的角色，包括线粒体的能量代谢、苹果酸-天冬氨酸穿梭系统、活性氧代谢和抗病性等。根据不 同的辅酶特异性，MDH 分为 NAD-依赖的 MDH 和 NADP-依赖的 MDH， NADP-MDH 主要存在于 真核细胞中。 NADP-MDH 催化 NADPH 还原草酰乙酸生成苹果酸，导致 340nm 处光吸收下降。
自备仪器和试剂
紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、可调节移液器、
1mL 石英比色皿和蒸馏水
操作步骤
粗酶液提取：
细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，弃上清，按照每
200 万细菌或细胞加入 400μL 提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率 20％，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次），8000g 4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。 组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心 10min，取上清，置 冰上待测。 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 340nm，蒸馏水调零。
2、试剂一置于 37℃水浴中预热 30min 以上（保证无沉淀）。
3、操作表：
试剂名称（μL）
测定管
空白管
样本
2
0
蒸馏水
2
0
试剂一
7
60
7
60
试剂二
1
0
1
0
试剂三
1
0
1
0
将上述试剂按顺序加入
1 mL 石英比色皿中，充分吹打混匀后立即记录 340nm 波长下初始吸 光度 A1 和反应 1min 后的吸光度 A2，计算 ΔA 空白=A1 空白-A2 空白，ΔA 测定=A1 测定-A2 测定，计算 ΔA=ΔA 测定-ΔA 空白。
三、
NADP-MDH 活力单位的计算：
1、血清（浆）NADP-MDH 活力的计算
单位的定义：每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟消耗
1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH（U/mL）=ΔA÷ε÷d×V 反总÷V 样÷T×109 =6430×ΔA ε：NADPH 消光系数，6.22×103 L/ mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.0008L； V 样：加入样品体积，0.02mL；T：反应时间，1min。
2、组织中 NADP-MDH 活力的计算:
（
1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每
mg 组织蛋白在反应体系中每分钟消耗 1nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH（U/mg prot）=ΔA÷ε÷d×V 反总÷（Cpr×V 样）÷T×109 = 6430× ΔA ÷Cpr
（
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每
g 组织在反应体系中每分钟消耗 1nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单位。
NADP-MDH（U/g 鲜重）=ΔA÷ε÷d×V 反总÷（W×V 样÷V 提取）÷T×109 = 6430 × ΔA ÷W ε：NADPH 消光系数，6.22×103 L/ mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.0008L； V 样：加入样品体积，0.02mL；V 提取：提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；Cpr :样本蛋白浓度， mg/ml；T：反应时间，1min。
3 细菌或培养细胞中 NADP-MDH 活力的计算:
单位的定义：每
1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟消耗 1nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单 位。
NADP-MDH（U/104 cell）=ΔA÷ε÷d×V 反总÷（200×V 样÷V 提取）÷T×109 =13 × ΔA ÷W ε：NADPH 消光系数，6.22×103 L/ mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应总体积，0.0008L； V 样：加入样品体积，0.02mL；V 提取：细胞提取液体积，0.4mL；200：200 万细胞；T：反应时 间，1min。
注意事项
1、粗酶液的提取必须在 0℃ - 4℃中操做完成，以防止酶变性失活。
2、实验时，试剂二、试剂三和样本在冰上放置，以免变性和失活。试剂一 37℃放置。
3、建议一人加样一人比色。尽量保持反应温度为 37℃。
4、空白管测 1-2 管即可。
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