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胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测试剂盒 微量法
  • 品牌:Solarbio
  • 产地:北京
  • 货号:BC0405
  • 发布日期: 2019-05-20
  • 更新日期: 2025-04-30
产品详请
产地 北京
品牌 Solarbio
货号 BC0405
保存条件 2-8℃保存
英文名称 Cytosolic isocitrate dehydrogenase (ICDHc) activity assay kit
CAS编号
保质期 1年

产品名称:胞浆异柠檬酸脱氢酶(ICDHc)活性检测试剂盒 微量法

产品英文名:Micro Cytoplasmic Citric Acid Dehydrogenase(ICDHc) Assay Kit

产品货号:BC0405            产地:北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格:100管/96样          产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存;            参考价格:640
库存状态:现货                          
关键字:胞浆异柠檬酸脱氢酶试剂盒|活性检测试剂盒|ICDHc活性检测|微量法

简要介绍:
ICDHc(EC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧 生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。 利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应,在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。
产品详细描述

产品内容:
提取液:120mL×1 瓶,4℃保存;
试剂一:粉剂×1 瓶,4℃保存;用时加入 20 mL 提取液溶解;
试剂二:粉剂×1 支,4℃保存;用时每支加 275μL 双蒸水充分溶解备用;
试剂三:粉剂×1 支,-20℃保存;用时每支加 275μL 双蒸水充分溶解备用;
产品说明:
   ICDHc(EC 1.1.1.42)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中,催化异柠檬酸脱氢脱羧 生成 α-酮戊二酸,同时还原 NADP+生成 NADPH。ICDHc 是细胞质中除了磷酸戊糖途径外又一种 NADPH 重要来源,在逆境中该酶活性通常会发生显著变化。 利用 ICDHc 催化 NADP+还原成 NADPH 反应,在 340 nm 下测定 NADPH 浓度的增加。   

自备仪器和用品
紫外分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/石英 96 孔板、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤
  • 样本的前处理:

  1. 细菌、细胞或组织样品的制备:

细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每 200 万细菌或细胞加 入 400μL 提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率 20%,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8000g 4℃ 离心 10min,取上清,置冰上待测。 组织:称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min,取上清,置 冰上待测。
  1. 血清(浆)样品:直接检测。

 
  • 测定步骤:

  1. 分光光度计预热 30min 以上,蒸馏水调零。

  2. 工作液配制:将试剂一、试剂二、试剂三按 85:1:1 的比例混合。

  3. 按下表步骤加样:

试剂名称(μL)测定管
工作液(μL)190
 样本(μL)10
将上述试剂按顺序加入 1 mL 石英比色皿中,加样本的同时开始计时,在 340 nm 波长下记录 20 秒时的初始吸光度 A1;迅速将比色皿连同反应液一起放入 37℃水浴中,准确反应 2 分钟;迅速取出比色皿并擦干,记录 2 分 20 秒时的吸光度 A2。计算 ΔA=A2-A1。
注意事项: 
  1. A2-A1 大于 0.5,需将酶液用提取液稀释,使 A2-A1 小于 0.5,可提高检测灵敏度。若初始值 A1 大于 0.5 可尝试将酶液用提取液稀释。

  2. 实验时,试剂二、试剂三和样本在冰上放置,以免变性和失活;工作液 37℃水浴放置。

  3. 比色皿中反应液的温度必须保持 37℃,取小烧杯一只装入一定量的 37℃蒸馏水,将此烧杯放入 37℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。

  4. *两个人同时做此实验,一个人比色,一个人计时,以保证实验结果的准确性。

 
  • ICDHc 活力单位的计算: 

  1. 按微量石英比色皿计算:

  1. 血清(浆)ICDHc 活力的计算:

单位的定义:每升血清(浆)在反应体系中每分钟生成 1 μmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/L)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×106 ]÷V 样本÷T=1608×ΔA
  1. 组织中 ICDHc 活力的计算:

  1. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(V 样本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr
  1. 按样本鲜重计算:

单位的定义:每 g 组织在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(W÷V 提取×V 样本) ÷T=1608×ΔA÷W
  1. 细菌或培养细胞中 ICDHc 活力的计算:

  1. 按样本蛋白浓度计算:

单位的定义:每 mg 组织蛋白在反应体系中每分钟生成 1 nmol NADPH 定义为一个酶活力单位。
ICDHc(U/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(V 样本×Cpr)÷T=1608×ΔA÷Cpr
  1. 按细菌或细胞密度计算:

单位的定义:每 1 万个细菌或细胞在反应体系中每分钟生成 1 nmol 的 NADPH 定义为一个酶活力单 位。
 ICDHc(U/104 Cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109 ]÷(V 样本×500)÷T=3.2×ΔA÷Cpr
V 反总:反应总体积,2×10-4 L;ε:NADPH 摩尔消光系数,6.22×103 L/moL/cm;d:石英比色 皿光径,1cm;V 样本:加入样本体积,0.01mL;V 提取:加入提取液体积,1mL;Cpr:样本蛋白 浓度,mg/mL;W:样本鲜重,g;T:反应时间,2min;500:细菌或细胞密度,104 个/mL。

 b、按石英 96 孔板计算: 将上述公式中光径 d-96 孔板光径改为 0.5cm。


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