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| 产地 | 北京 |
| 品牌 | Solarbio |
| 货号 | BC1075 |
| 用途 | |
| 英文名称 | Pyruvate decarboxylase (PDC) activity assay kit |
| 包装规格 | |
| 纯度 | % |
| CAS编号 | |
| 保质期 | 1年 |
| 是否进口 |
产品规格：100管/96样 产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存； 参考价格：1660
库存状态：现货
关键字: ： 丙酮酸脱羧酶检测试剂盒|PDC检测试剂盒| 丙酮酸脱羧酶|试剂盒
简要介绍：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。
产品详细描述
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存。
试剂一：液体18mL×1瓶，4℃保存。
试剂二：液体20mL×1瓶，4℃保存。
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存。
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存。
混合试剂：临用前配制，将试剂三和试剂四用适量试剂二溶解后再全部转移到试剂二中备用。
试剂五：液体2mL×1瓶，4℃保存。
产品说明：
PDC主要存在于酵母中，是乙醇发酵的关键酶之一，催化丙酮酸脱羧生成乙醛。
PDC催化丙酮酸脱羧生成乙醛，添加乙醇脱氢酶（ADH）来进一步催化 NADH还原乙醛生成乙醇和NAD+；NADH在340 nm有吸收峰，而NAD+没有；通过测定340 nm光吸收下降速率，来计算PDC活性。
自备仪器和用品：
台式离心机、紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量石英比色皿/ 96孔（UV板）、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细胞或微生物样品的制备：
先收集细胞或微生物样品到离心管内，弃上清，按照每500万细胞或微生物加入1mL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3s，间隔10s，重复30次）。10000rpm，4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
2、组织样品：
称取约0.1g组织，加入1mL提取液，冰上充分研磨。16000g 4℃离心20min，取上清，置冰上待测。
3、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、 紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、 试剂一37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）水浴提前预热30min。
3、 操作表：
试剂名称（μL） | 测定管 | 空白管 |
试剂一 | 140 | 140 |
试剂五 | 20 | 20 |
混合试剂 | 20 | 20 |
样本 | 20 | - |
蒸馏水 | - | 20 |
迅速混匀后于340nm比色，记录10s和70s的吸光值，测定管的记为A1和A2，空白管的记为A3和A4，计算ΔA=（A1-A2）-（A3-A4）。空白管只需做1-2次。
三、PDC活性计算：
A.使用微量石英比色皿测定的计算：
1、血清（浆）PCD活力的计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每毫升血清（浆）在反应体系中每分钟催化1 μmol NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/mL）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷V样本÷T=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)]。
2、 组织中PDC活力的计算：
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每mg组织蛋白在反应体系中每分钟催化1μmol NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/mg prot）=[(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷(V样本×Cpr)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每g组织鲜重在反应体系中每分钟催化1μmol NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/g 鲜重）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷ (W÷V提取×V样本)÷T
=1.6×[(A3-A4)-(A1-A2)] ÷W。
3、细菌或培养细胞中PDC活力的计算：
按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）中，每1万个细菌或细胞在反应体系中每分钟催化1μmol的NADH氧化定义为一个酶活力单位。
PDC（U/104 Cell）= [(A3-A4)-(A1-A2)]×V反总÷(ε×d)×106÷(V样本÷V提取×500)÷T
=3.2×10-3×ΔA÷Cpr
ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V总：反应体系总体积， 0.2mL=2×10-4 L，V样：加入反应体系中上清液体积，0.02mL；Cpr：蛋白浓度（mg/mL），需要另外测定，建议使用本公司BCA蛋白质含量试剂盒；T：反应时间，1 min；W：样本鲜重，g；V提取：提取液体积，1mL；500：细菌或细胞总数，500万个细胞。
B.使用96孔UV板测定的计算：
将上述公式中的d-1cm（比色皿光径） 换为d-0.6cm（96孔板光径） 进行计算即可。
注意事项：
1、实验时，混合试剂、试剂五和样本在冰上放置，以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、*两个人同时做此实验，一个人比色，一个人计时，以保证实验结果的准确性。
4、如果1分钟变化值较小可延长反应时间，同时注意修改计算公式。
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