产品名称: 异柠檬酸裂解酶(ICL)检测试剂盒 微量法

产品英文名: Micro Isocitrate Lyase （ICL)Assay Kit

产品货号：BC2035          产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼

产品规格：100管/96样        产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            参考价格：1780
库存状态：现货                          
关键字:   异柠檬酸裂解酶检测试剂盒|ICL检测试剂盒|异柠檬酸裂解酶|试剂盒

简要介绍：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL 是乙醛酸循环的关键酶之一。 
    ICL 催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和 NADH 在 LDH 的作用下生成乙醇和NAD，NADH 在 340nm 下有特征吸收峰，监测 340nm 吸光度的减小速率可间接反应 ICL 活性。 

产品详细描述
产品内容：
提取液：液体100mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体3mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体4mL×1瓶，4℃保存；
试剂三：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL双蒸水，充分混匀待用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前每瓶加入5mL双蒸水，充分混匀待用；用不完的试剂仍-20℃保存；
试剂五：液体×1支，4℃保存；临用前每支加入320μL双蒸水，充分混匀待用；用不完的试剂仍4℃保存；
试剂六：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前每瓶加入5mL双蒸水，充分混匀待用。用不完的试剂-20℃保存；
产品说明：
ICL（EC4.1.3.1）主要存在于植物和微生物中，油料作物种子在萌发过程中，通过乙醛酸循环及其他过程将脂肪转变成碳水化合物。ICL是乙醛酸循环的关键酶之一。
ICL催化异柠檬酸降解为乙醛酸和琥珀酸，乙醛酸和NADH在LDH的作用下生成乙醇和NAD，NADH在340nm下有特征吸收峰，监测340nm吸光度的减小速率可间接反应ICL活性。
自备实验用品及仪器
  紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、样品前处理：
1、细菌或细胞处理：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照每200万细菌或细胞加入400μL提取液，超声波破碎细菌或细胞（功率20％，超声3秒，间隔10秒，重复30次），15000g，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。
2、组织处理：称取约0.1g组织，加入1mL提取液进行冰浴匀浆；15000g ，4℃，离心20分钟，取上清，置冰上待测。
二、测定步骤
1、紫外分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
2、工作液配制：按试剂一：试剂二：试剂三：试剂四：试剂五=29:35:42:42:3的比例将各试剂混合后备用。
3、样本测定

 将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中，加试剂六的同时开始计时，在340nm波长下记录10秒时的初始吸光度A1，比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴中准确反应2分钟；迅速取出比色皿并擦干，340nm下比色，记录2分10秒时的吸光度A2，计算ΔA=A1-A2。
注意事项：
1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置，以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃，取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水，将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
三、ICL活性计算：
A用微量石英比色皿测定的计算公式如下
1、组织中ICL活力的计算:
（1）按样本蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白在反应体系中每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ICL（U/mg prot）=ΔA ÷（ε×d）×V反总×10⁹÷(V样本×Cpr) ÷T=2297×ΔA÷Cpr
（2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织在反应体系中每分钟消耗1nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ICL（U/g 鲜重）=ΔA ÷（ε×d）×V反总×10⁹÷(W÷V提取×V样本) ÷T=2297×ΔA÷W
V反总：反应总体积，0.2×10^-3L；V样本：加入样本体积，0.007mL；ε：NADH摩尔消光系数，6.22×10³L/moL/cm；d：微量石英比色皿光径，1cm；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；V提取：加入提取液体积，1mL；W：样本鲜重，g；T：反应时间，2min。