中性木聚糖酶(NEX)活性检测试剂盒说明书
微量法

产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
产品商标：solarbio
货号: BC2595
规格: 100T/48S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：860
库存状态：现货


产品内容：
缓冲液：液体60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体5mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体8mL×1 瓶，4℃避光保存
标准品：粉剂×1 支，10mg 木糖，临用前加入667μL 蒸馏水配成100μmol/mL 的标品溶液，再稀释25 倍即得4μmol/mL 的木糖标准溶液，备用。

产品说明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，中性木聚糖酶(NEX)一般分离自最适生长pH 为6-8 的微生物。

NEX 在中性环境中催化木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，在沸水浴条件下进一步与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm 吸光值增加速率，可计算NEX 活力。

试验中所需的仪器和试剂：
低温离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96 孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细胞或微生物样品发酵液的制备：
发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，置于冰上待测。
2、组织：
称取约0.1g 组织，加入1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000g，4℃离心15min，取上清，置冰上待测。
3、酶干粉：
称约1mg，加缓冲液1mL，震荡充分溶解。
二、测定步骤：
1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、将上清液/酶溶液用蒸馏水稀释十倍后置冰上待测。
3、操作表：
加入试剂        对照管     测定管       标准管       空白管
样品（μL）        50         50           -            -
标准品（μL）      -           -           50           -
蒸馏水（μL）      -           -           -            50
缓冲液（μL）      75         75           75           75
试剂一（μL）      -          50           50           50
混匀，盖紧瓶盖，50℃水浴，反应30min，立即沸水浴10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
试剂一（μL）      50          -            -             -
试剂二（μL）      75          75           75            75
混匀，沸水浴显色5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冰浴冷却后吸取200μL 至96 孔板/比色皿中，尽快测量540nm 波长下的吸光值A 对照管、A 测定管、A标准管、A 空白管，计算ΔA 测定=A 测定管-A 对照管，ΔA 标准=A 标准管-A 空白管。

三、NEX 计算公式
1. 发酵液NEX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH 6.0 条件下每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力（U/mL）=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ]÷T=0.13×ΔA 测定÷ΔA 标准
2. 酶干粉NEX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH 6.0 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力（U/mg）=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ] ×V 样品×10÷(V 样品×W 酶÷V 提取)÷T=1.33×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W 酶。
3. 组织中NEX 活力的计算:
（1）按样品蛋白浓度计算：
酶活定义：50℃，pH 6.0 条件下，每mg 组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的
酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力（U/mg prot）=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ] ×V 样品×10÷(V 样品×Cpr)÷T=1.33×ΔA 测定÷ΔA 标准÷Cpr。
（2）按样品鲜重计算：
酶活定义：50℃，pH 6.0 条件下，每g 组织每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个中性木聚糖酶的活力单位。
NEX 活力（U/g 鲜重）=[ΔA 测定÷(ΔA 标准÷C 标准) ] ×V 样品×10÷(V 样品×W÷V 提取) ÷T=1.33×ΔA 测定÷ΔA 标准÷W。

C 标准：木糖标准溶液，4μmol/mL；
V 样品：加入的样品体积，0.05mL；
W 酶：酶干粉的质量，mg；
T：反应时间，30min；
Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；
W：组织样品鲜重，g；
V 提取：提取液体积，1mL；
10：样品稀释倍数。

注意事项：
1. 吸光度变化应该控制在0.01~1.5 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变；也可以延长或者缩短反应时间。
2. 试剂盒2-8℃保存，保质期3 个月，建议尽快使用。