酸性木聚糖酶(ACX)活性检测试剂盒说明书
微量法
产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
产品商标：solarbio
注意：正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定。
货号：BC2605
规格：100T/48S
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；            
参考价格：860.00
库存状态：现货

产品内容：
缓冲液：液体60mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体7mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂二：液体10mL×1 瓶，4℃避光保存。
试剂三：液体4mL×1 瓶，4℃保存。
标准品：粉剂×1 支，4℃保存。10mg 木糖，临用前加入667μL 蒸馏水溶解，得到100μmoL/mL 木糖溶液，蒸馏水稀释50 倍得到2μmoL/mL 木糖标准溶液。

产品说明：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物产生，能催化水解木聚糖，也被称为戊聚糖酶或半纤维素酶，可分解酿造或饲料工业中的原料细胞壁以及β-葡聚糖，降低酿造中物料的粘度，促进有效物质的释放，以及降低饲料中的非淀粉多糖，促进营养物质的吸收利用，因而广泛的应用于酿造和饲料工业中，酸性木聚糖酶(ACX)一般分离自耐酸的真菌，细菌及部分霉菌。
ACX 在酸性环境下能将木聚糖降解成还原性寡糖和单糖，进一步在沸水浴条件下与3,5-二硝基水杨酸发生显色反应，在540nm 处有特征吸收峰，反应液颜色的深浅与酶解产生的还原糖量成正比，通过测定反应液在540nm 吸光值增加速率，可计算ACX 活力。

需自备的仪器和用品：
天平、低温离心机、恒温水浴锅，可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96 孔板和蒸馏水。

操作步骤：
一、粗酶液提取
1. 发酵液：发酵液于8000rpm，4℃，离心15min，取上清，作为待测样品。
2. 酶干粉：称约1mg，加1mL 缓冲液溶解，蒸馏水稀释10 倍待测。
3. 组织样品：称约0.1g 组织，加入1mL 缓冲液，冰上充分研磨。8000rpm，4℃，离心15min，取上清蒸馏水稀释10 倍待测。
二、测定步骤
1、可见分光光度计/酶标仪预热30min 以上，调节波长至540nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在EP 管中加入下列试剂）
试剂名称（μL）           对照管      测定管     空白管      标准管
样品                       60          60         -           -
2μmoL/mL 木糖标准品       -           -          -           60
蒸馏水                     -            -           60          -
缓冲液                     90          90           90         90
试剂一                     -           60           60         60
         混匀，50℃水浴中反应30min，立即沸水浴中10min 灭活。(注意不要让盖子爆开，以免进水，改变了反应体系)
试剂一                     60           -            -          -
试剂二                     90          90            90         90
试剂三                     30          30            30         30
混匀，沸水浴中显色5min(注意不要让盖子爆开，以免进水改变了反应体系)，冷却后吸取200μL 至96 孔板或比色皿中，尽快测定各管540nm 下的吸光度，分别记为A 测定、A 对照、A 标准、A 空白。

三、ACX 活性计算：
1. 发酵液ACX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫升发酵液每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（U/mL）=C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷T=0.067×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）
C 标准：木糖标准溶液浓度，2μmoL/mL；
T：反应时间，30min。
2. 酶干粉ACX 活力计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每毫克酶每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（U/mg）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W1÷T=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W1
10：样本稀释倍数，10 倍；
C 标准：木糖标准溶液浓度，2μmoL/mL；
V 提取：加入缓冲液体积，1mL；
W1：酶干粉重量，mg；
T：反应时间，30min。
3. 组织中ACX 活力计算：
（1）按样品蛋白浓度计算：
酶活定义：50 ℃，pH 4.8 条件下，每mg 组织蛋白每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（U/mg prot）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 样品÷（V 样品×Cpr）÷T=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷Cpr。
（2）按样品鲜重计算：
酶活定义：50℃，pH4.8 条件下，每克组织每分钟分解木聚糖产生1μmol 还原糖所需的酶量为一个酸性木聚糖酶的活力单位。
ACX 活力（U/mg）= 10×C 标准×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）×V 提取÷W2÷T=0.67×（A 测定-A 对照）÷（A 标准-A 空白）÷W2
10：样本稀释倍数，10 倍；
C 标准：木糖标准溶液浓度，2μmoL/mL；
V 提取：加入缓冲液体积，1mL；
W2：样本鲜重，g；
T：反应时间，30min；
Cpr：样品蛋白浓度，mg/mL；
V 样品：加入的样品体积，0.06mL。

注意事项：
1. 吸光度变化应该控制在0.01~1.5 之间，否则加大样品量或稀释样品，注意计算公式中参与计算的稀释倍数要相应改变。
2. 试剂盒2-8℃保存，保质期3 个月，建议尽快使用。