产地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
货号 | BC3170 |
保存条件 | 2-8℃保存 |
英文名称 | Acetate kinase (ACK) activity detection kit |
保质期 | 1年 |
产品名称: 乙酸激酶(ACK)活性检测试剂盒
产品规格:50管/48样 产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:1700
库存状态:现货
关键字: 乙酸激酶检测试剂盒|ACK检测试剂盒|乙酸激酶|试剂盒
简要介绍:
ACK广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理如下:(1)ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙tong酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙tong酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙tong酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下测定NADH氧化生成NAD+速率,即可反映ACK活性。
产品详细描述
产品内容:
提取液:液体50mL×1瓶,4℃保存;
试剂一:液体30mL×1瓶,4℃保存;
试剂二:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前每瓶加入4mL双蒸水,充分溶解待用。用不完的试剂仍4℃保存;
试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入3mL双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
试剂四:粉剂×2瓶,-20℃保存;临用前每瓶加入2mL双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
试剂五:粉剂×1支,-20℃保存;临用前每支加入1mL双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂-20℃保存;
试剂六:液体43μL×2支,4℃保存;临用前每支加入457μL双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂4℃保存;
试剂七:液体50μL×2支,-20℃保存;临用前每支加入450μL双蒸水,充分溶解待用;用不完的试剂仍4℃保存;
试剂八:粉剂×1瓶,4℃保存;临用前加入5mL双蒸水,充分溶解待用。用不完的试剂仍4℃保存。
工作液:吸取0.3mL 试剂二、1mL试剂三、0.65mL试剂四、0.2mL试剂五、0.2mL试剂六、0.2mL试剂七、1mL试剂八混匀,也可根据比例现用现配。于冰上备用。
产品说明:
ACK广泛存在于生物体内,催化乙酸和ATP生成乙酰磷酸和ADP,是细菌碳代谢和能量代谢的关键酶,尤其是在古细菌甲烷合成代谢中起着中枢作用。
测定原理如下:(1)ACK催化乙酸钠和ATP生成乙酰磷酸和ADP,(2)丙tong酸激酶催化ADP和PEP生成ATP和丙tong酸,(3)乳酸脱氢酶催化丙tong酸和NADH生成乳酸和NAD+,(4)在340nm下测定NADH氧化生成NAD+速率,即可反映ACK活性。
自备实验用品及仪器
台式离心机、紫外分光光度计、水浴锅、1mL石英比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰、蒸馏水。
操作步骤:
一、样品前处理:
1、细菌或细胞处理:
收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照每500万细菌或细胞加入1mL提取液,超声波破碎细菌或细胞(功率20%,超声3秒,间隔10秒,重复30次),15000g,4℃,离心20分钟,取上清,置冰上待测。
2、组织处理:
称取约0.1g组织,加入1mL提取液进行冰浴匀浆;15000g ,4℃,离心20分钟,取上清,置冰上待测
3、血清(浆):直接检测。
二、测定步骤
紫外分光光度计预热30min以上,调节波长至340nm,蒸馏水调零。
将试剂一于37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)保温15min。
操作表:
试剂 | 测定管 | 空白管 |
蒸馏水 | - | 100 |
试剂一(μL) | 545 | 545 |
工作液(μL) | 355 | 355 |
样本(μL) | 100 | - |
将上述试剂按顺序加入1 mL石英比色皿中,加样本的同时开始计时,在340nm波长下记录20秒时的初始吸光度A1,比色后迅速将比色皿连同反应液一起放入37℃(哺乳动物)或25℃(其它物种)水浴中准确反应3分钟;迅速取出比色皿并擦干,340 nm下比色,记录3分20秒时的吸光度A2,计算ΔA测定=A测定1-A测定2,ΔA空白=A空白1-A空白2,计算ΔA=ΔA测定-ΔA空白。
三、ACK活性计算:
组织中ACK活力的计算:
(1)按样本蛋白浓度计算:
单位的定义:每mg组织蛋白每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK(U/mg prot)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(Cpr×V样) ÷T=536×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算:
单位的定义:每g组织每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK(U/g 鲜重)= [ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V提取×W) ÷T=536×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞密度计算:
单位的定义:每1万个细菌或细胞每分钟消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK(U/104 cell)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷(V样÷V样总×500) ÷T=1.072×ΔA
(4)按血清体积计算:
单位的定义:每mL血清(浆)中消耗1 nmol的NADH定义为一个酶活力单位。
ACK(U/mL)=[ΔA×V反总÷(ε×d)×109]÷V样 ÷T=536×ΔA
V反总:反应体系总体积,0.001L;ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103 L/mol/cm;d:比色皿光径,1cm; V样:加入样本体积,0.1 mL;V提取:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,3 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样品质量,g;500:细菌或细胞总数,500万。
注意事项:
1、测定过程中样本和所有试剂在冰上放置,以免变性和失活。
2、比色皿中反应液的温度必须保持37℃或25℃,取小烧杯一只装入一定量的37℃或25℃蒸馏水,将此烧杯放入37℃或25℃水浴锅中。在反应过程中把比色皿连同反应液放在此烧杯中。
3、吸光值大于1时,建议稀释后测量,注意计算公式乘以稀释倍数;吸光值小于0.01时,建议延长反应时间测量,注意计算公式变化。