产品名称：超氧化物歧化酶测定试剂盒 微量法
产品英文名：Micro Superoxide dismutase(SOD) Assay Kit
产品货号：BC0175                          产地：北京市通州区马驹桥联东U谷85A三楼
产品规格：100管/48样                      产品商标：solarbio
保存与运输：4℃保存或-20℃保存；           参考价格：560
库存状态：现货                          
关键字：超氧化物歧化酶试剂盒|超氧化物歧化酶|SOD|SOD活性检测

简要介绍：
SOD（EC 1.15.1.1）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-.)，O2-.可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O2-.，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD活性愈低，反之活性越高。

产品详细描述

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BC0175-100管/48样	560.00元

产品内容：
提取液：
液体 100mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 5mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存，用时加 13.2mL 双蒸水配制成悬浊液，使用前充分摇匀；
试剂三：液体 100μL×1 支，4℃保存；
试剂四：液体 4mL×1 瓶，4℃保存。
试验中所需的仪器和试剂： 可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水

产品说明： 
SOD（EC1.15.1.1）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超 氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2和 O2。SOD 不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是 H2O2主要 生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2-)，O2-可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜， 后者在 560nm 处有吸收；SOD 可清除 O2-，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明 SOD 活 性愈低，反之活性越高。

操作步骤： 
一、样品的前处理：
1. 细菌或培养细胞：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104个）： 提取液体积（mL）为 500-1000:1 的比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破 碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10s，重复 30 次）， 8000g4℃离心 10min， 取上清，置冰上待测。
2. 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为 1:5-10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000g4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1. 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 560nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将试剂一、二和四 37℃（哺乳动物）或 25℃（其它物种）水浴 5min 以上。
3. 样本测定（按顺序加入下列试剂）

充分混匀，室温静置 30min 后，560nm 处测定各管吸光值 A。计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，Δ A 空白=A 空 1-A 空 2。如底部有沉淀，混匀后再行测定。

注意：
1、试剂二为悬浊液，注意混匀后加入。试剂三为酶，不可冷冻，使用时在冰上放置。 
2、样本较多时，可按表格配置工作液（包含试剂一、二、四），试剂三必须*加入。
3、空白管 1 和空白管 2 各只需做 1~2 管；每个样本有一个对照管。
4、反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。

三、SOD 活性计算：
1、 抑制百分率的计算 抑制百分率＝( ΔA 空白－ΔA 测定)÷ΔA 空白×100% 尽量使样品的抑制百分率在 30-70%范围内，越靠近 50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小 于 30%或大于 70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适 当稀释样品；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样品。
2、 SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶藕联反应体系中抑制百分率为 50%时，反应体系中 的 SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。
3、 SOD 酶活性计算：
（1） 血清（浆）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总]÷V 样×样本稀释倍数 =11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)×样本稀释倍数
（2）组织、细菌或培养细胞 SOD 活力计算：
A 按样本蛋白浓度计算 SOD 活性(U/mgprot)=〔抑制百分率÷（1－抑制百分率）×V 反总〕÷（V 样×Cpr）×样本稀释倍数 =11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷Cpr×样本稀释倍数
B 按样本鲜重计算 SOD 活性(U/g 鲜重)=〔抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总〕÷(W×V 样÷V 样总)×样本稀释倍数 =11.4×抑制百分率÷(1－抑制百分率)÷W×样本稀释倍数 C 按细菌或细胞个数计算 SOD 活力(U/104cell)=〔抑制百分率÷(1－抑制百分率)×V 反总〕÷(500×V 样÷V 样总)×样本稀释倍数 =0.0228×抑制百分率÷(1－抑制百分率)×样本稀释倍数
V 反总：反应体系总体积，1.026mL；V 样：加入反应体系中样本的体积，0.09mL；V 样总：加 入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样品质量，g；500：细胞或细菌总数， 500 万。

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