产品详细描述
产品内容：
提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体50mL×1瓶，4℃保存；
试剂二： 粉剂×1支，-20℃保存；临用前每支加入1.11mL双蒸水，充分溶解备用，分装后-20℃保存，避免反复冻融；
试剂三：液体6mL×1瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入3mL双蒸水，充分混匀；
试剂五：粉剂×1瓶, 4℃保存；临用前加入8mL双蒸水，充分混匀；
试剂六：粉剂×1瓶, 4℃保存；临用前加入8mL双蒸水，充分混匀；
试剂七：液体8mL×1 瓶，室温保存。
标准品：液体1mL×1 支，4℃保存。10μmol/mL磷标准液。临用前用蒸馏水稀释40倍即0.25μmol/mL 磷标准液。
定磷试剂的配制：按H2O：试剂五：试剂六：试剂七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷试剂应为浅黄色。若无色则试剂失效，若是蓝色则为磷污染（请根据需要，用*配*）。
注意：配试剂*用新的烧杯、玻璃棒和玻璃移液器，或者一次性塑料器皿，以避免磷污染。
 
产品说明：
线粒体复合体Ⅴ又称F₁F₀-ATP合酶，广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中，由F1和F0两个亚单位组成。该酶利用呼吸链产生的质子电化学梯度催化ATP合成，也可逆过程水解ATP。此外，复合体Ⅴ还存在于叶绿体、异养菌和光合细菌中。复合体Ⅴ是线粒体氧化磷酸化和叶绿体光合磷酸化合成ATP的关键酶。
复合体Ⅴ水解ATP产生ADP和Pi，通过测定Pi增加速率来测定复合体Ⅴ活性。
试验中所需的仪器和试剂：
台式离心机、可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、微量玻璃比色皿/96孔板、可调式移液枪、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、复合体Ⅴ的提取：   

• 称取约0.1g组织或收集500万细胞，加入1.0 mL提取液，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。

• 4 ℃ 600 g离心10min。

• 将上清液移至另一离心管中，4 ℃ 11000 g离心15min。

• 上清液即胞浆提取物，可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅳ（此步可选做，可以判断线粒体提取效果）。

• 在沉淀中加入400uL提取液，超声波破碎（功率20％，超声5秒，间隔10秒，重复15次），用于复合体Ⅳ酶活性测定，并且用于蛋白含量测定。

二、测定步骤：

1. 可见分光光度计预热30min以上，调节波长至660nm，蒸馏水调零。

2. 操作表：

1. 酶促反应

2. 定磷

混匀，40℃水浴10min，尽快在660nm测定吸光值，分别记为A测定管、A对照管、A标准管，计算ΔA=A测定管-A对照管。


注意事项：

1. 为保证实验结果的准确性，需先取1-2个样做预实验，如果测定的吸光值过高（高于1），可用蒸馏水稀释上清液后再测定。计算结果时注意乘以稀释倍数。若ΔA大于0.4，需将样本稀释适当倍数（计算公式中乘以相应稀释倍数），使A1-A2 小于0.2，可提高检测灵敏度；若ΔA偏小，则可以通过增加加入的样品体积来提高灵敏度。

2. 由于提取液中含有蛋白，所以在测定样品蛋白浓度时需要减去提取液本身的蛋白含量（单独测量）。

3. 本试剂盒试剂足够完成50管反应。

4. 附：使用样本重量计算公式：（检测样本数为50T/24S）

相关文献：

《A Damaged Oxidative Phosphorylation Mechanism Is Involved in the Antifungal Activity of Citral against Penicillium digitatum》 作者:Qiuli OuYang, Nengguo Tao* and Miaoling Zhang 期刊:Frontier in Immunology 影响因子:4.259 PMID:29503638