产地 | 北京 |
品牌 | Solarbio |
货号 | BC2335 |
保存条件 | 2-8℃保存 |
英文名称 | Chymotrypsin activity assay kit |
保质期 | 1年 |
产品规格:100管/96样 产品商标:solarbio
保存与运输:4℃保存或-20℃保存; 参考价格:1200
库存状态:现货
关键字:: 糜蛋白酶检测试剂盒|糜蛋白酶检测|糜蛋白酶|试剂盒
简要介绍:
糜蛋白酶,又称胰凝乳蛋白酶,是*分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似,但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手术后伤口愈合,如白内障摘除。
糜蛋白酶催化ATEE水解,产物在237nm有特征光吸收;通过测定237nm光吸收增加速率,来计算糜蛋白酶活性。
产品详细描述
产品内容:
试剂一:液体×1 瓶,4℃保存。
试剂二:粉剂×1 瓶,4℃避光保存。临用前加入20mL蒸馏水充分溶解。
产品说明:
糜蛋白酶,又称胰凝乳蛋白酶,是*分泌的一种蛋白水解酶,能迅速分解变性蛋白质。糜蛋白酶的功能与胰蛋白酶相似,但是具有分解能力强、毒性低和不良反应小等优点。临床上糜蛋白酶用于痰液稀化,对脓性和非脓性痰液均有效;也用于创伤或手术后伤口愈合,如白内障摘除。
糜蛋白酶催化ATEE水解,产物在237nm有特征光吸收;通过测定237nm光吸收增加速率,来计算糜蛋白酶活性。
试验所需自备仪器和样品:
台式离心机、水浴锅、可调式移液器、研钵、紫外分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板(UV 板)、冰和蒸馏水。
操作步骤:
一、粗酶液提取:
组织:按照组织质量(g):试剂一体积(ml)1:5-10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1ml试剂一进行冰浴匀浆。8000g,4℃离心10min,取上清即粗酶液。
测定:
1. 分光光度计/酶标仪预热30min,调节波长到237nm,蒸馏水调零。
2. 试剂二置于37℃水浴中保温30min。
3. 空白管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL试剂一,200μL试剂二,混匀于237nm测定4min内吸光值变化,记为△A 空白管。(从吸光值稳定增加开始计时)
4. 测定管:取微量石英比色皿/96孔板,加入20μL 粗酶液,200μL试剂二,混匀于237nm测定4min内吸光值变化,记为△A测定管。(从吸光值稳定增加开始计时)
注意:空白管只需要测定一次。
三、糜蛋白酶活性计算:
a.使用微量石英比色皿测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/g)=(△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
W:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2 mL;V2:粗酶液总体积(mL),1 mL;V 反总:反应总体积,220μL=0.22mL; T:反应时间(min),4min。
b.使用 96 孔板测定的计算公式如下
(1)按蛋白浓度计算
活性单位定义:25℃每毫克蛋白每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/mg prot)= (△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(Cpr×V1)÷T
=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷Cpr
(2)按样本质量计算
活性单位定义:25℃每克样品每分钟催化吸光值增加1为一个酶活单位。
糜蛋白酶(U/g)=(△A 测定管-△A 空白管) ×V 反总÷(W×V1÷V2)÷T
=2.75×(△A 测定管-△A 空白管)÷W
W:样品质量(g);Cpr:粗酶液蛋白质浓度(mg/mL),需要另外测定;V1:加入反应体系中粗酶液体积(mL),20μL=2×10-2 mL;V2:粗酶液总体积(mL),1 mL;V 反总:反应总体积,220μL=0.22mL; T:反应时间(min),4min。
注意事项:
临用前配置的试剂配置好后3天内使用完毕。